结构生物学论文血蓝蛋白的结构和功能综合分析说明.docVIP

血蓝蛋白的结构和功能 刘雪莹 摘要：关键词：；；； The structure and function of hemocyanin LIU Xue-ying Abstract: 　Hemocyanin is a multifunctional protein and recently recognized with immune activities，it exists in arachnology, it’s main function is to carry oxygen. This article mainly introduces the structure and function of hemocyanin. Keywords: hemocyanin; arthropod hemocyanin; mollusk hemocyanin; structure and function 收稿日期：2012—6—25 作者：刘雪莹 除极低等的少数动物外, 绝大多数动物的氧运输均需要血液中特殊蛋白质的参与, 这类参与呼吸作用的蛋白质家族统称为呼吸蛋白。动物的呼吸蛋白划3大类:血红蛋白( hemoglobin, Hb)、 血蓝蛋白( hemocyanin, Hc)和蚯蚓血红蛋白( hemerythreins, Hr)。本文介绍血蓝蛋白。血蓝蛋白又称血蓝素 但最新研究表明血蓝蛋白Cu （I），可结合一个O2，下方为第三个域，由β折叠块构成，并含有Ca 离子,功能尚不详。[3] 节肢动物血蓝蛋白的三级结构经过进化，已分化成： ①酚氧化酶原；②昆虫的六聚蛋白，不螯合Cu（I），为贮藏蛋白； ③甲壳类的假血蓝蛋白，也为贮藏蛋白；④双翅类的六聚蛋白受体。 典型的节肢动物血蓝蛋白是由六个高度螺旋的异源亚基构成的六聚体，六聚体中每个亚基折叠为三个结构域， 其中第一、 三结构域分别为亚基蛋白的N、 C 端,第二结构域含血蓝蛋白的活性部位, 活性部位结合有两个铜离子 CuA 和CuB,每个铜离子分别与蛋白质链上三个组氨酸的咪唑氮原子配位。传统上将构成六聚体的单个亚基称为血蓝蛋白的最小功能单位,或称为单体。[4]节肢动物血蓝蛋白四级结构如图二。 1.2 软体动物血蓝蛋白结构 血蓝蛋白三级结构第1 域为α螺旋区，螯合一对 Cu（I），可结合一个 O2 ，第2 域为β折叠块,可能也含有Ca 离子。用 X光晶体衍射法已在头足类的章鱼Octopus dofleini 中获得了软体动物血蓝蛋白的三维构象（图三）。[5] 软体动物血蓝蛋白的亚单位很大，相对分子质量可达350 000～450 000 Da ，每个亚单位由7～8 个在大小上约为50 000 Da 的相似功能单位(FU)组成，命名为a～h。2 个外壁(a、 b、 c 和d构成) 反向组成二聚体，5 个二聚体构成双五聚体。中心由领(collar ,即功能单位 h 组成双五聚体，头足类中无领) ，领外为拱(arc ,即功能单位g组成双五聚体)，再向外为功能单位e 和f ,这三部分合成核心(core) 结构。核心结构外为外壁构成了中凹的血蓝蛋白的半个分子（图五）。[6] 2血蓝蛋白的功能 血蓝蛋白是一种呼吸蛋白，它最主要的功能就是载氧。另外，它还有抗病毒功能、凝血功能及抗菌等功能。血蓝蛋白特别是软体动物血蓝蛋白广泛应用在抗肿瘤、 增强免疫、 检测曼氏血吸虫及日本血吸虫病和研制血吸虫病疫苗等领域， 是当前呼吸蛋白研究的热点之一。[7] 2.1载氧功能 血蓝蛋白以Cu（I）作为辅基， [8]主要生理功能为载氧。血蓝蛋白的活性中心有两个Cu离子，脱氧状态（一价Cu离子）呈无色，氧合状态（二价Cu）离子呈蓝色。血蓝蛋白载氧亚单位分3个结构区域：区域I存在大量α螺旋；区域Ⅱ(第176—400个氨基酸残基)，含α螺旋及双铜离子（氧分子键合部位）；剩余258 个氨基酸残基构成区域III,是类似于超氧化物歧化酶的β折叠结构。在活性中心，每个铜离子与 3个组氨酸残基的咪唑氮配位。未氧合时，铜离子与组氨酸残基咪唑氮的配位基本上是三角形几何构型，铜离子相距46 pm，相互作用很弱。氧合后，Cu （Ⅱ）为四或五配位，两个铜离子与过氧阴离子和 6 个组氨酸残基中最靠近铜离子的4 个组氨基酸残基咪唑氮强配位。此时，每个铜离子呈平面正方形几何构型，这是 Cu ( Ⅱ)最有利的配位状况。氧分子以过氧桥形式在连接两个 Cu ( Ⅱ)，两个 Cu ( Ⅱ)相距约36 pm。载氧过程可表示为图六：[9] 2.2酚氧化物酶活性 对血蓝蛋白的进化地位进行了分析的结果提示，血蓝蛋白可能是在大约 55 亿年前由酚氧化物酶进化而来。酚氧化酶原激活系统在甲壳动物的免疫识别和防御中起着关键作用， 近年的研究表明甲壳动物血蓝蛋白与酚氧