反义RNA介导的大肠杆菌非必需基因rpsF的基因沉默.pdfVIP

Short Communication 研究简报 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 54 (4 ) :449 － 454 ; 4 April 20 14 ISSN 000 1 － 6209 ; CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn doi : 10. 13343 / j ． cnki． wsxb ． 20 14 . 04 . 0 12 反义 RNA 介导 的大肠杆 菌非必需基 因 rp sF 的基因沉默 1 ，3 2 ，3 3 1* ， ， ， 唐欣茹 殷瑜 戈梅 陈代杰 1 ， 200237 华 东理工大学生物工程学 院 上 海 2 ， 200240 上 海交 通大学 药 学 院 上 海 3 ， 20 1203 上 海 来 益生物 药物研究 开发 中心 上 海 : 【 】 RNA rp sF 。 摘要 目的 探讨反 义 技术 介 导 的大 肠 杆 菌 非 必 需 基因 基因 沉 默 导致 菌 体 生 长 受 抑 制 的原 因 【 】 rp sF 5 4 1 － 230 bp pHN678 ， 方法 将 基因 端 的片段 反 向插 入 带有末 端配对结 构 的反义表达 载 体 获得 重组 ， RNA Escherichia． coli / pHNF ， IPTG RNA ， 质 粒 导入 大肠 杆菌宿主 获得 反义 菌 株 并用 诱 导 剂 诱 导 反 义 表 达 通 过 与对 照 菌 E ． coli / pHN678 的液 体 生长状 态 差 异 判 断菌 体 生长表 型 ;采 用 Real time RT -PCR 方 法 跟 踪 分 。 【 】 rp sF RNA ， IPTG 。IPTG 析转录 水平 结果 构建 了针对 的反义 菌株 且其 生长 受抑制程度 与 浓度 呈 正相关 100 mol / L ， ， rp sF mRNA 36 % ， rp sR 浓度 为 μ 时 菌 体 生长 未受抑制 但靶基因 的 量降低 了 而 是位 于同一操 纵 ， ;IPTG 200 mol / L ， ， 子下游 的必 需基因 其 转录 水平 却 未受 影响 浓度 为 μ 时 菌 体 生长 明显 受 抑 制 经 分 析 发现