碱性成纤维细胞生长因子复合透明质酸钠凝胶对兔桡骨骨折愈合中细胞增殖的影响.pdfVIP

34 中国兽 医杂志 2009年(第 45卷)第 1O期 碱性成纤维细胞生长因子复合透 明质酸钠凝胶 对兔桡骨骨折愈合中细胞增殖的影响 杨 峰 ，丛恒飞 ，方 英 ，曾若雪 ，谢富强 ，谢秋玲。，汪 炬。，刘杰森。，李志英。 (1．中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193；2．贵阳市农业局，贵州 贵阳 550014； 3．暨南大学生物工程研究所 ，广东 广州 510623) 中图分类号：$857．16 4；$852．2 文献标识码 ：B 文章编号：0529—6005(2009)10—0034—02 骨折愈合过程 中需要 多种细胞的参与，且这些 向B组注入 SH 0．1mL，向C组注入 bFGF溶液 细胞需要达到一定的数量才能满足修复的需要 。碱 0．1mL，向D组注入 bFGF／sH复合物 0．1mL。 性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfac— 1．3 手术方法 动物麻醉、剃毛、消毒后沿右侧桡 tor，bFGF)是一种广谱的有丝分裂原 ，对中胚层源 骨内侧切开皮肤 、皮下组织 ，逐层分离，暴露桡骨骨 和神经外胚层源 的成纤维细胞有 明显的促增殖作 体 。在桡骨中部用金钢砂锯片锯断桡骨，同时用无 用 ，刺激 DNA合成和细胞分裂口]。增殖细胞核抗 菌生理盐水冲洗 、冷却 。对 照组不注入任何试剂， 原 (proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)是一 SH组注入 0．1mISH，bFGF组注入 0．1mLbF— 种细胞核蛋白，是衡量细胞增殖状态的重要生物学 GF，bFGF／SH组注入 0．1mIbFGF／SH 复合物， 指标 ]。本试验 以透明质酸钠凝胶 (sodiumhyalur— 分层缝合，严密关闭术创。 onate，SH)为载体外源性应用 bFGF于兔桡骨骨折 分别于术后 1、2、4、8、12周时处死动物，取材 。 模型，采用免疫组织化学方法观察 PCNA在骨痂 中 1．4 免疫组织化学方法 组织 固定 ，冲洗 ，脱钙 ，正 的表达 。 丁醇透明、包埋 ，制备 6 m 切片。切片脱蜡至水后 1 材料与方法 DAB免疫组化染色观察 。计数方法每张切片在骨 1．1 bFGF溶液和 bFGF／SH 复合物 的制备 将 折区域连续计数 4个高倍 (×400)视野，计算 出各 自 bFGF1．6mg溶于 2mL双蒸水中，无菌过滤 ，然后 相应 PCNA 阳性细胞 标记 指数 (PCNA 阳性 细胞 放于真空冷冻干燥机 中冻干，最后与 0．8mL无菌 数 ／总计数细胞数 ×100 )来评价。 生理盐水混合 ，用移液器吹打均匀 ，混合仪再混匀 ， 1．5 统计方法 采用 sAs(V8)软件对所得数据进 每0．1mL生理盐水中含 bFGF0．2mg。 行统计分析 。 将 bFGF1．6mg溶于 2mL双蒸水中，无菌过 2 结果 滤，然后放于真空冷冻干燥机 中冻干，最后与 SH 术后第 2周 ：SH组和对照组 ，PCNA表达水平 0．8mL混合 ，用移液器吹打均匀，混合仪再混匀，每 不高 ，阳性细胞核呈褐色 ，且细胞核着色较弱 (图 0．1mI复合物中含 bFGF0．2mg。 1)。bFGF组 PCNA呈较高水平表达 ，细胞核着色 1．2 实验动物及分组 纯种健康新西兰 白兔 64只 较重。bFGF／SH组 PCNA呈 高水平表达，多数细 (北京市海淀区兴隆实验动物养殖厂)，体重 2．0～ 胞的细胞核中可见棕褐色团块 (图 2)。 2．3kg。雌雄不限。碱性成纤维细胞生长因子 (暨南 大学生物工程研究所提供)。透明质酸钠凝胶 (杭州 嘉伟生物制品有限公司生产)。 实验兔随机分为 A(对照组)、B(透