截形苜蓿液泡膜H^＋ -PPase基因克隆与序列分析.pdfVIP

西北植物学报 ，2009，29(3)：0435—0442 ActaBot．Boreai．一Occident．Sin． 文章编号 ：1000—4025(2009)03—0435—08 截形苜蓿液泡膜 H+-PPase基因克隆与序列分析 王建武 ，沈裕虎 ，王 沛 ，王海庆 ¨ (1中国科学院 西北 高原生物研究所 ，西宁 810001；2中国科学院 研究生 院，北京 100049) 摘 要 ：采用 EST电子克隆技术 ，以拟南芥 AVP1基 因cDNA序列为信息探针 ，在 GenBank中对豆科模式植物截 形苜蓿(Medicagotruncatula)的同源 EST序列进行查询 比较和拼接 ，获得 了 1个完整 的cDNA序列跨叠群 (con— tig)，并通过 RT-PCR成功获得 了该 cDNA序列，将其命名为MtVP1。该序列包含 1个 2298bp的最大读码框 ，编 码 765个氨基酸。MtVP1编码的氨基酸序列与来 自绿豆、拟南芥等高等植物的I类液泡膜 Hr。PPase的氨基酸序 列 的一致性高达 84 ～93 ，疏水性分析和结构预测表 明MtVP1编码蛋 白是一个典型 的膜 蛋白，含有 13个跨膜 区，含有 3个在液泡膜 H PPase中高度保守 的区域 (CS1、CS2和CS3)。从结构分析结果推测MtVP1与AVP1在 功能上具有相似性 。 关键词 ：液泡膜 H ～PPase；截形苜蓿 ；电子克隆 中图分类号 ：Q789 文献标识码 ：A CloningandCharacterizationofA Vacuolar H+-PPaseGenefrom M edicagotruncatula WANG Jianwu～，SHEN Yu—hu ，WANG Pei～，W ANG Hai—qing (1NorthwestPlateauInstituteofBiology，ChineseAcademyofSciences，Xining810001，China；2GraduateUniversityofChinese AcademyofSciences，Beijing100049，China) Abstract：A vacuolarH 一PPasecDNA ，namedMtVP1，wasclonedfrom thelegumemodelplantM edicago truncatula byEST insilicocloningandRT—PCR．UsingArabidopsisthalianaAVP1cDNA sequenceasa queryingprobetosearchagainstMedicagotruncatula EST databaseinGenBank，contigcontainingafull— lengthcDNA sequencewasobtainedbyEST mergingandprovedwithRT—PCR．Thesequenceanalysishas revealedthatM tVP1containsamaximum openreadingframeof2298bpfor765aminoacids．Thededuced aminoacidsequencewashighlysimilartovacuolarH 一PPasefrom otherplants，suchasVignaradiataand Arabidopsisthaliana，with an identity of84 ～ 93 ．ComputionalanalysisshowedM ￡ lisatypical membraneprotein With 13 trans—membranedomainsand contained threeconservativedomains (CS1。CS2 andCS3)invacuolarH 一PPase．Itssequenceconservationandstructuresim ilaritywithA P1impliedthat MtVP1hadsimilarfunctionwithAVP1． Keywords：vacuolarH 一PPase；M edicagotruncatula；ins