毒力岛基因ibeT有助于大肠杆菌抵抗人脑微血管内皮细胞溶酶体的降解.pdfVIP

l’● ： P-I]；8 … 、】lnVw．pibb．ac．cn 毒力岛基因ibeT有助于大肠杆菌抵抗人脑 微血管内皮细胞溶酶体的降解 术 张 可 ” 赵伟东” 李 强 方文刚 朱 莉 陈誉华 … (中国医科大学基础医学院发育生物学教研室，卫生部细胞生物学重点实验室，沈阳 110001) 摘要 大肠杆菌是导致新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌．为探讨毒力岛基因 e 在大肠杆菌K1株致病过程 中的作用，构建了ibeT基因缺失的大肠杆菌K1株，细菌在细胞 内存活试验结果显示， e基因缺失抑制了大肠杆菌K1株 在人脑微血管内皮细胞中的生长．利用激光共聚焦扫描显微镜观察到，在细菌侵袭进入人脑微血管内皮细胞后，与野生型相 比，ibeT基因缺失突变株较多地滞留在溶酶体 内；透射 电镜结果进一步显示，ibeT基因缺失使大肠杆菌K1株逃逸 ECV(含 有大肠杆菌的囊泡)的能力发生了下降，继而使其在细胞浆 内的复制减少．利用体外模拟的弱酸性环境，检测大肠杆菌菌体 胞 内的缓冲容量，发现 e 基因缺失突变株菌体胞 内的缓冲能力较野生型低．这些结果提示，在大肠杆菌K1株侵袭进入人 脑微血管内皮细胞后， e基因有利于大肠杆菌降解 ECV膜，避免与溶酶体融合，进而促使大肠杆菌逃逸进入细胞浆并进 行复制 ． 关键词 ibeT，大肠杆菌K1株，人脑微血管内皮细胞，溶酶体，逃逸 学科分类号 R37 DOI：10．3724／SP．J．1206．2008．00590 新生儿细菌性脑膜炎是儿科严重感染性疾病之 islandofmeningiticE colicontainingibeA 4【】．GimA 一 ， 临床上尽管可 以选用相应的抗生素治疗 ，但是 仅存在于E coliK1，其他非脑膜炎大肠杆菌中均 病死率仍然 得不到显 著 的改善 [一·．大肠 杆菌 不含 GimA序列． e基因是GimA中的一个编码 coZ)是导致新生儿脑膜炎最常见的革兰 氏阴性 基因，全长 1404bp，推断的编码蛋 白约 50l(u． 致病菌z[．现 已知，引起大肠杆菌性脑膜炎的首 有研究显示，ibeT基因缺失的E coliK1突变株对 要条件是：血行播散的大肠杆菌必须穿过主要 由脑 人脑微 血管 内皮 细胞 (humna brainmicrovascular 微 血 管 内皮 细 胞 (brainmicrovascularendothelial endothelialcells，HBMECs)的黏附和侵袭能力下 cells，BMECs)组成 的血脑屏障 ．大肠杆菌穿过 降5【j．我们在最近的研究中发现了汤e基因有利于 BMECs涉及两个关键性环节，一是E coli黏附并 E coliK1在 HBMECs中进行繁殖的新现象，并对 侵袭进入 BMECs，二是 cD 在 BMECs中逃避 其涉及的机制进行了探讨 ． 宿主细胞的防御并进行繁殖，最终穿过BMECs入 1 材料和方法 脑 ．近年来，学者们利用分离培养的BMECs作为 研究模型，先后鉴定了致脑膜炎大肠杆菌中的一些 1．1 材料 侵袭 BMECs相关基因，如 fimH，ompA，ibeA， E coliK1株 RS218(O18：K1：H7)由新生儿 ibeB，CNF1等，并对与大肠杆菌侵袭相关的细胞 内信号转导通路进行了探 讨2[13】，但是对于进入 BMECs中的E c0 如何逃避宿主细胞的防御并进 国家 自然科学基金 30500277)和辽宁省博士启动基金 行繁殖的机制 目前尚