基于噬菌体展示单链抗体文库的新型蛋白质均衡器的研制及….pdfVIP

!# 年$ 月 色 谱 $%’ !% (%’ !# !# !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+1 2 !’# ( !$ 基于!! 噬菌体展示单链抗体文库的新型蛋白质均衡器 的研制及其在肾病患者尿蛋白分析中的应用 ! 赵, 鹏，, 陶定银，, 梁, 振，, 张丽华 ，, 张玉奎 （中国科学院大连化学物理研究所，中国科学院分离分析化学重点实验室，辽宁 大连 ))-! ） 摘要：通过将展示单链抗体（?5@A ）文库的! ) 噬菌体固定于冷凝胶整体柱表面制备了一种新型蛋白质均衡器。 由于展示的?5@A 片段具有种类多、数目大以及与蛋白质结合的特异性强等优点，因此其非常适合用于复杂蛋白质 样品的预处理。将肾病患者尿蛋白在平衡器上反复上样$ 次后，依次使用! -%B C (7 、$ --%B C D#, 7 （6 !. $ ）和凝血酶溶液洗脱与均衡器结合的蛋白质，收集各馏分，并采用串联微柱反相液相色谱, 电喷雾质谱进行蛋白 质的分离鉴定。与未经均衡器处理的样品相比，鉴定的蛋白质数目由)’! 个提高到#- 个。此外，凝胶电泳的分析 结果显示，在上样流出液中蛋白质的浓度差异明显变小，大量的高丰度蛋白质存在于 (7 洗脱液中。上述结果表 明，基于! ) 噬菌体展示 ?5@A 文库的新型蛋白质均衡器能够有效减小样品中蛋白质的浓度差异，有利于发现更多 的低丰度蛋白质。 ! ) 噬菌体展示单链抗体文库；串联微柱反相液相色谱, 电喷雾质谱；蛋白质；肾病患者；尿 关键词：蛋白质均衡器； 中图分类号：E-$*, , 文献标识码：F, , 文章编号：),*% ) （!# ）,!’#,$, , 栏目类别：研究论文 #$%’ ()$*+# ,-.’+/) 0.12 $# 1+#3’ 45.+# %.)+.0’ 6).37#* 2+1(’.8 !! (5.3 ’+0).)8 6$) #(5)$(.*58 (.*+#* -)+# 1*-28 GFE H*23 ，)FE I.23#.2 ，CJF(D G/*2 ，GF(D C./0 ! ，GF(D 0K0. （! #$% %’ ($() (* +, -.*/$0# 1 .2’$0’ ，(.* -.$%*’* 3 04*/2 +, 50$*%0*’ ；6 *2 7 8+9(+92 +, 5*: 9($+% 50$*%0* , +9 3 %#2($0# -.*/$’ (92 ，(.* -.$%*’* 3 04*/2 +, 50$*%0*’ ，! #$% !!#$% ，-.$% ） 01*).4* ：F 2%A* 6L%M*.2 *N0.1*L O? 4*A*%6*4 O.M/ ?.23* 5/.2 AL.P* QL3-*2M （?5@A ） .PLL# 4.?6#.23 ! ) 6/3* 5%A*2M# P%24*4 %2 -%2%.M/.5 5L#%3*’ I0* M% M/* 3L*M 20-P*L 24 AL.%0? K.24? %Q 4.?6#*4 ?5@A QL3-*2M? ，? O* ? ?ML%23 24 ?6*5.Q.5 P.24.23 565.M# P*MO**2 ?5@A QL3-*2M? 24 6L%M*.2? ， 2*O 6L%M*.2 *N0.1*L M