水稻条纹病毒致病相关蛋白与宿主相互作用的研究.docVIP

RSV CP与植物和昆虫宿主互作的研究 (赵淑玲 学号: D08037 导师: 梁建生教授) 摘要:水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的水稻条纹叶枯病对水稻生产造成了巨大损失，特别是近几年来该病连续爆发流行引起了人们的普遍关注，因此弄清RSV的致病机理和如何防治病害发生成为研究者迫切希望解决的问题。虽然目前RSV基因组功能方面有了一些初步研究，但是该病毒与宿主互作及病毒的致病机理还未有研究报道，病毒的侵染和致病机理还不清楚。RSV的衣壳蛋白（Capsid protein,CP）是一种多功能蛋白，在病毒的侵染、复制、运动和传播方面均起重要作用。因此本项目拟开展RSV CP与植物和昆虫相互作用的研究，通过此项工作深入了解CP在病毒的致病及传播过程中所起的作用，同时还可对病毒的侵染机理以及病毒与宿主的相互作用有更深层次的认识，也为开展植物抗病毒基因工程的研究和应用奠定基础。 关键词：RSV；衣壳蛋白；相互作用；侵染机理 1. 研究背景及意义 水稻条纹病毒的危害 水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)是水稻条纹叶枯病的致病原，该病毒仅靠介体昆虫传播，其他途径不能传病。介体昆虫主要为灰飞虱，灰飞虱一旦获毒就可终身带毒并且经卵进行持久性传播。感染RSV的水稻发病初期病株心叶沿叶脉呈现断续的黄绿色或黄白色短条斑，以后常连成褪绿大片，使叶片一半或大半变成黄白色。早期发病植株枯死，发病迟的只在剑叶或叶鞘上有褪色斑，但抽穗不良或穗畸形不实，病株分蘖一般减少。水稻条纹叶枯病最早于1897年在日本发现,在我国自1963年在苏南地区始发后,已经扩散到18个省市,特别是近几年来在江苏和河南连续暴发,造成了水稻生产上的巨大损失。该病害2001年在江苏、河南等地暴发流行，病田率达50%以上, 2004年再次大规模流行，病田率达75%以上,且自2004年来该病持续流行,对水稻生产构成了严重威胁[1]。 1.2 水稻条纹病毒的基因组结构及功能 RSV属于纤细病毒属( Tenuivirus)，基因组由4条单链RNA组成，共编码7个不同的功能蛋白(如图1所示)。除RNA1采用负链编码策略, RNA2 ～RNA4均采取双义编码策略,即在RNA的毒义链( viral RNA, vRNA)和毒义互补链( viral complementary RNA, vcRNA )的靠近5′端处各有一个开放阅读框(open reading frame, ORF) ,都可以编码蛋白质[2,3,4,5]。 RSV RNA1采取负链编码策略，vcRNA1编码病毒的RNA聚合酶（RdRp）[6]。RSV RNA2正链编码一非结构蛋白NS2，目前NS2的功能还未知。序列分析表明，RSV vcRNA2编码的NSvc2蛋白与番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒膜糖蛋白前体的氨基酸序列之间有相似性，推测NSvc2为病毒的膜糖蛋白。Liang等[7]在灰飞虱唾液腺和中肠的上皮细胞中检测到NSvc2蛋白，且可以和SP在中肠中积累，形成纤维质状的电子质不透明内含体，而这种内含体在植物中几乎不存在。这意味着NSvc2蛋白和SP都有可能在病毒与昆虫介体的识别中起作用。RNA3正链编码的蛋白为RNA沉默抑制子，能够抑制植物、昆虫细胞和哺乳动物细胞的RNA沉默[8，9]。vcRNA3编码病毒的衣壳蛋白（CP），RNA4正链编码致病症状相关蛋白（SP）。许多研究结果已经揭示了衣壳蛋白（CP）和致病症状相关蛋白（SP）在病叶中的积累量与褪绿花叶症状的严重度密切相关,推测这两种蛋白都是致病相关蛋白[10，11]。明艳林等[12]发现CP和SP存在于受侵染水稻的叶绿体内,其浓度与病叶症状的严重度呈正相关，并且RSV粒体能够进行体外叶绿体跨膜运输研究,结果表明,病毒粒体能快速进入离体叶绿体。vcRNA4编码病毒的移动蛋白，Xiong等[13]通过实验证实NSvc4能够使缺失移动蛋白的PVX病毒恢复运动功能，从而从烟草的一个细胞达到另一个细胞，因此推测NSvc4蛋白是RSV的移动蛋白。 图1. RSV的基因组结构 1.3 本项目立项依据和研究意义 水稻条纹叶枯病近几年来连续爆发流行，给水稻生产带来了严重的危害,因此如何防治病害发生及控制病害的流行成为研究者迫切希望解决的问题。虽然对RSV 基因功能进行了一些初步研究，但还有很多基因的功能未知，特别是该属病毒的侵染和致病机理研究未深入，病毒致病的整个过程还不清楚。另外由于RSV是多片段的负链RNA病毒,不易建立侵染性克隆,因此目前还不能采用如缺失突变、片段重组等传统基因工程方法来研究其基因功能。这也给RSV基因功能的研究工作带来了困难，使得R