第十二章核酸的生物合成-1.pptVIP

第十二章 核酸的生物合成 中心法则 12.1 DNA的半保留复制 12.2 DNA复制的过程 复制的起始点 DNA的复制开始于染色体上固定的起始点。 起始点是含有100－200个碱基对的一段DNA。 DNA的复制是随着解链和解旋同时进行的（复制叉）。 DNA复制的方向 DNA复制可以朝一个方向，也可以朝两个方向进行。 大多数生物染色体DNA的复制是双向进行的。 在迅速生长的原核生物中，第一个染色体DNA分子的复制尚未完成，第二个DNA分子就在同一个起始点上开始复制。 在真核生物染色体的不同位置上有多个起始点。如，在30000个碱基对长的果蝇染色体DNA上有2000－3000个复制起始点。 复制叉移动速度慢，但数目多，因此，真核生物染色体DNA复制的总速度比原核生物快。 DNA复制所需要的原料？ 模板 dNTP 引物 DNA聚合酶 Mg2+ DNA 聚合酶 DNA聚合酶I： 催化DNA链的延长； 外切酶（从3‘或5’端把DNA链水解） DNA聚合酶II： 催化DNA聚合反应； 外切酶活性（无5‘－3’外切酶活力）； 活性低 DNA聚合酶III： DNA链的聚合； 活性最强。 ＊ 模板 ＊ dNTP ＊ 引物 (3’-OH) ＊ DNA链合成的方向 (5’-3’) ＊ 合成的两条子链是互补的 12.3 双链DNA复制的分子机制 后随链 不连续合成 DNA连接酶 连接酶催化一个DNA链的5‘磷酸根与另一个DNA链的3’羟基形成磷酸二酯键。 要求: 两条链必须与同一个互补链结合； 两个链必须相邻； 反应需能。 后随链的合成过程： 复制的起始（RNA引物的合成） 链的延长（向引物RNA3’端添加DNA顺序，合成冈崎片断） 复制的终止（RNA引物脱落并代以相应的DNA顺序，连接酶连接各冈崎片断） 参与大肠杆菌染色体DNA复制的主要蛋白质 12.4 真核细胞DNA的复制 基本过程与原核细胞十分相似，主要不同之处： 真核细胞DNA复制有许多起点：DNA复制有许多复制子共同完成。总复制速度要快于原核细胞。 目前已确定，较高等生物中至少有5种DNA聚合酶，各司其职。 端粒的复制：线性染色体末端DNA称为端粒。端粒的复制由一种特殊的酶——端粒酶催化。该酶是一种核糖核蛋白。在真核细胞中，当复制叉到达线性染色体末端时，复制过程在端粒酶作用下完成。 12.5 DNA的损伤与修复 限制性内切酶 ? 由同一个限制酶切断得到的任何两个DNA片断的黏性末端都可以互相配对，然后每条DNA链的断开部分再通过DNA连接酶连接起来。——基因重组 质粒——比较小的双链环形DNA。只占细胞DNA的一小部分，但常含有某些抗性基因。 纯化的质粒常用作克隆载体。 Polymerase chain reaction (PCR) 体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术，即无细胞分子克隆技术。 以待扩增的两条DNA链为模板，由一对仍合成的寡聚核苷酸引物介导，通过DNA聚合酶酶促反应，快速体外扩增特异的DNA序列。（扩增数百万倍） 操作简单，快速，特异，灵敏 切除修复（暗修复） 专一的内切酶 DNA聚合酶进行局部修复 连接酶 ?一类能识别DNA特定核苷酸序列的核酸内切酶，简称限制酶。 12.6 分子生物学中几个常见概念 ?这类酶能在特定核苷酸序列处切开核苷酸之间的键，使DNA产生双链裂口，进而被脱氧核糖核酸酶水解。 ?如果这个识别序列中的碱基经过修饰，限制酶就不再作用。通常寄主的DNA因在该核苷酸序列处被甲基化而得到保护，但外源DNA则因限制酶的作用而分解。 高专一性 (DNA) 特异的结合位点 (4~8 bp) 5’ …pGAATTCp…3’ 3’ …pCTTAAGp…5’ 5’ …pG AATTCp…3’ 3’ …pCTTAAp Gp…5’ 限制酶的特点： 黏性末端 5’ …pGAA TTCp…3’ 3’ …pCTT AAGp…5’ 平头末端 DNA克隆 ? 任何DNA片断都能通过先插入质粒或细菌病毒DNA，然后在细胞内进行扩增，这个由单一DNA片断复制成许多相同DNA片断的过程称为“克隆”。 聚合酶链式反应(PCR) * * 反转录 复制时DNA的两条链分开，然后通过碱基配对方式以单链DNA为模板合成新链。这样新形成的两个DNA分子与原来DNA分子的碱基顺序完全一样。每