DNA的粗提取实.pptVIP

D N A 的粗提取实验 实验原理 1.DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而变化的，DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低 2.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质可以溶于酒精溶液 3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色 几次加蒸馏水？目的？ 几次过滤？目的？ 几次加NaCl？目的？ 用到了哪些试剂，有什么作用？ 实验步骤 制备鸡血细胞液：在新鲜鸡血中加入抗凝剂——柠檬酸钠，离心后除去上清液 1.提取鸡血细胞中的细胞核物质 鸡血细胞液 加蒸馏水20ml 搅拌 纱布过滤 取滤液 2.溶解细胞核内的DNA 向滤液中加入2mol/LNaCl溶液 操作重点：加入NaCl溶液，用玻璃棒沿一个方向搅拌 目的：使DNA溶于NaCl溶液中 3.析出含DNA的粘稠物 向含DNA的NaCl溶液中加蒸馏水 操作重点：缓缓加入蒸馏水，用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌 目的：析出DNA 现象：出现白色丝状物质 4.滤取含DNA的粘稠物 操作要点：多层纱布过滤 现象纱布上有白色的粘稠物 5.将DNA的粘稠物再溶解 加入2mol/LNaCl溶液 操作要点：用盾头镊子夹取粘稠物，用玻璃棒沿一个方向搅拌 现象：粘稠物被溶解 6.过滤含有DNA的NaCl溶液 操作要点：用两层纱布过滤 目的：去除杂质 7.提取含杂质较少的DNA 向滤液中加入95%的冷酒精 操作要点：加入冷酒精，用玻璃棒沿一个方向搅拌 现象：有白色的丝状物DNA析出 8.DNA的鉴定 注意事项 1.鸡血要充足 2.新鲜鸡血中要加入抗凝剂——柠檬酸钠。最后要除去上清液 3.盛放鸡血的容器，最好是塑料容器 4.获取较纯的DNA的关键 （1）加入足量的蒸馏水，充分搅拌鸡血细胞液，以使细胞膜和核膜破裂 （2）沉淀DNA时必须用冷酒精 （3）正确搅拌含有悬浮物的溶液（步骤3、5、7） 5.实验中有三次过滤：步骤1、4、6 6.两次使用蒸馏水：步骤1、3 7.三次加入ＮａＣｌ溶液：步骤2、5、8 对三次过滤的叙述中，不正确的是（ ） A.第一次过滤时，核物质存在于滤出的固体物中 B.第二次过滤时，使用多层纱布，DNA存在于纱布上的粘稠物中 C.第三次过滤后，DNA存在于滤液中，可进一步除去非DNA物质 D.以上B、C均正确 在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ ） A.加快溶解DNA的速度 B.加快溶解杂质的速度 C.减小DNA的溶解度，加快DNA的析出 D.较小杂质的溶解度，加快杂质的析出 在DNA的粗提取实验中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是（ ） A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 在实验中，有两次DNA的沉淀析出，其中依据的原理是（ ） ①DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低②DNA在冷却的体积分数为95%的冷酒精中能沉淀析出 A.两次都是① B.两次都是② C.第一次是①，第二次是② D.第一次是②，第二次是① 下列实验中所用试剂错误的是（ ） A.在观察植物细胞有丝分裂实验中，实验醋酸洋红溶液使染色体着色 B.在提取叶绿体色素实验中，实验丙酮提取色素 C.在DNA的粗提取与鉴定实验中，实验氯化钠溶液析出DNA D.在蛋白质的鉴定实验中，实验苏丹Ⅲ染液鉴定蛋白质 用15N标记含有100个碱基对的DNA分子，其中有胞嘧啶60个，该DNA分子在14N的培养基中连续复制4次，其结果不可能是（ ） A.含有15N的DNA分子占1/8 B.含有14N的DNA分子占7/8 C.复制过程中需腺嘌呤脱氧核苷酸600个 D.复制结果共产生16个DNA分子 实验过程 1.标记大肠杆菌 用含35S的培养基培养大肠杆菌，得到含35S的大肠杆菌 用含32P的培养基培养大肠杆菌，得到含32P的大肠杆菌 2.标记噬菌体 用一部分噬菌体侵染含35S的大肠杆菌，得到含35S的噬菌体 用另一部分噬菌体侵染含32P的大肠杆菌，得到含32P的噬菌体 3.噬菌体侵染没有被标记的大肠杆菌 4.保温、搅拌、离心，确定上清液和沉淀中放射性元素的存在情况 实验结果 用35S标记的一组侵染实验，主要在上清液中检测到了放射性同位素 而用32P标记的一组实验，却主要在试管的沉淀物中检测到了放射性同位素 子代噬菌体中能检测到32P，但不能检测到35S