不同钙营养状态下骨保护蛋白配体与慢性氟中毒大鼠骨质改变关系研究.pdf

不同钙营养状态下骨保护蛋白配体与 慢性氟中毒大鼠骨质改变关系的研究 刖 罱 地方性氟中毒(简称地氟病)是由于人们生活在高氟环境中长期摄入 过量氟而造成的全身慢性中毒性病变。其主要临床表现是氟斑牙和氟骨 症。是否发生氟骨症与机体的营养状态尤其是钙营养状态有关。在经济水 平较发达的国家和地区，由于居民的营养状态比较好，耐氟能力强，地氟病 的严重表现一般也只是轻度或中度的氟斑牙，主要是牙齿美容方面的问题， 而在一些发展中国家和地区，高氟区居民的营养状态较差，有不同程度的氟 骨症发生，严重者可丧失劳动能力和生活自理能力。 骨保护蛋白配体(osteopmtegerin1培and，0PGL)是人们继发现骨保护蛋 组2005届研究生张莹关于0PG与慢性氟中毒大鼠骨质硬化关系的研究结 果表明，慢性氟中毒大鼠0PG表达水平增强。在骨生物学研究中OPGL已 被证实是破骨细胞发育、活化、生存所必需的一种重要活性物质。目前关于 氟中毒时0PGL的改变特征报道较少。本实验通过观察不同钙营养状态下 的不同染氟剂量组大鼠染毒3个月后血清氟、尿氟、骨氟、骨组织形态学结 构以及0PGL在骨组织中的表达等指标的改变情况，探讨不同钙营养状态 下0PGL与慢性氟中毒大鼠骨质改变的关系，旨在从分子水平深化对氟骨 症发病机制的认识，为阐明氟骨症发病机制提供新的线索。 材料与方法 1．动物分组 分为常规钙饲料组和低钙饲料组，两组内部又分为3个剂量亚组。3个剂 量亚组分别为：对照组(或称低氟组，饮用蒸馏水，氟含量为omgF一／L)、中 ·l· 氟组(饮水氟含量为50 mgF一／L)、高氟组(饮水氟含量为100mgF一／L)。 实验周期为3个月。 2．大鼠体内氟负荷与日尿氟排泄量测定 大鼠体内氟负荷用血清氟和骨氟含量表示。骨氟含量采用管式炉高温 燃烧水解法一氟离子选择电极法测定。血清氟含量和尿氟排泄量采用氟离 子选择电极法测定。 3．0PGL的免疫组织化学染色及显微图像分析 将大鼠胫骨固定，脱钙，分切修整，脱水，石蜡包埋，制作切片，用于HE 染色及免疫组化染色。用兔抗鼠oPGL作为一抗，羊抗兔IgG作为二抗，进 行免疫组化染色。光镜下观察，并将数值化图像输入图像分析系统，对染色 强度进行半定量分析。每例随机选取5个高倍视野，测定0PGL免疫组化 染色灰度值、平均光密度等指标，取每张切片的均值作为该例的测量值。 4．统计方法 采用sPSsl2．0统计软件进行方差分析等。 结 果 1．大鼠一般状况及氟斑牙发生睛况 实验期间，常规钙饲料组大鼠一般状态良好，低钙饲料组大鼠一般状态 较差。低钙饲料组大鼠较常规钙饲料组大鼠出现氟斑牙的时间早。实验期 末，各染氟组大鼠均出现不同程度的氟斑牙表现，且随染氟剂量的升高，氟 斑牙损伤程度加重。 2．骨氟、血清氟和尿氟水平 低钙饲料组和常规钙饲料组的中、高氟组大鼠骨氟、血清氟及尿氟含量 均明显高于各自对照组(PO．01)，且随染氟剂量增加骨氟、血清氟、尿氟 水平均明显升高。同等染氟剂量(中、高氟组)大鼠低钙饲料组较常规钙饲 料组的骨氟、血清氟、尿氟水平均明显升高(Po．01)。 3．骨组织的形态学观察及0PGL免疫组化染色 3．1HE染色结果 进食低钙饲料和常规钙饲料的中、高氟组大鼠骨组织结构均较其各自 对照组发生改变，可见骨小粱增生、变粗、排列紊乱。 3．20PGL免疫组化染色结果 ．0． 对照组大鼠骨组织中，0PGL表达于骨皮质中的成骨细胞和骨髓腔内 的骨髓基质细胞中。在成骨细胞和骨髓基质细胞中，胞膜为棕色阳性着色， 细胞核为蓝色阴性染色。染氟组大鼠骨皮质中0PGL阳性表达明显增多， 骨髓基质细胞中阳性表达也显著增强。常规钙饲料组和低钙饲料组在同等 染氟剂量时镜下观察0PGL表达差别不显著。 4．0PGL表达水平的半定量分析 常规钙饲料和低钙饲料的中、高氟组灰度值均明显低于其各自对照组 (Po．05)。不同钙营养状态下的中、高氟