低密度脂蛋白受体缺失转基因小鼠中高胆固醇血症参与肾小球硬化机制研究.pdf

Out)转基因小鼠中 低密度脂蛋白受体缺失(Knock 高胆固醇血症参与肾小球硬化机制的研究 中文摘要 肾小球硬化是导致肾功能减退的主要原因之一，严重威胁患者的生命健康。很多 肾脏疾病发展到终末期，均会造成肾小球硬化，目前关于肾小球硬化的机理还不清楚。 研究发现，肾脏疾病的进展与脂质代谢紊乱密切相关，尤以高胆固醇血症与肾小球疾 病的关系较为密切。进一步的研究表明，低密度脂蛋白的氧化修饰在’肾小球损害的过 程中起着重要作用。因此，研究高胆固醇血症参与肾小球硬化的机制可以为临床对肾 小球硬化的防治提供理论依据，具有极其重要的临床意义。 ≯j才斌实验以低密度脂蛋白(10wdensitylipoprotein，LDL)受体KnockOut(KO)转基因 小鼠为载体，研究高胆固醇血症和低密度脂蛋白的氧化修饰在肾小球损害进展中的作 用，探讨肾小球硬化的机理，并对相关药物对肾脏损害的防治作用进行了较为长期和 系统的观察。 材料与方法 本实验过程中小鼠的样本总数为55只，雄性，8一12周龄，体重在20～25克。给实验 小鼠腹腔注射嘌呤霉素核甘(purimycin wt， wt)，D组： 高胆固醇饮食组，C组：高胆固醇饮食+普伐他汀(pravastatin，10mg／kg wt)，E组：高胆固醇饮食+维生素E 高胆固醇饮食+依那普利(enalapril，5mg／kg (vitamin E，100IU／kg)。 本实验检测项目包括以下内容： l、各组小鼠在实验不同阶段的24小时尿蛋白含量、血浆脂质水平和。肾功能水平。 2、不同实验组小鼠肾组织一氧化氮(nitric (malonyldialdehyde，MDA)水平。 3、各组小鼠在实验结束时行肾组织HE切片光镜观察，免疫组化检测I型胶原、IV型 胶原、纤维连接蛋白(fibronectin，FN)、基质金属蛋白酶2(mattix2． TIMP-11。 nitric oxide mRNA的表达水平。 synthase．iNOSl factor, 5、应用RT一巢式PCR方法检测肾组织内转移生长因子D】(transforminggrowth TGF[3．1、mRNA的表达水平。 实验结果 那普利和维生素E可降低24小时尿蛋白水平(P0．05)。 2、高胆固醇饮食组的血浆总胆固醇和LDL胆固醇水平明显高于普通饮食组 (P0．叭)，普伐他汀和依那普利给药组出现降低趋势，其中以普伐他汀的作用最为 明显；维生素E末出现明显的降低血脂的作用(P0．05)。实验各组小鼠血浆甘油三 酯和高密度脂蛋白水平在整个实验过程中均未出现明显差异。 4、高胆固醇饮食组肾组织内NO含量明显低于普通饮食组，维生素E组‘跨组织内NO 含量明显高于胆固醇饮食组(PO．01)，普伐他汀组也呈现上升趋势，依那普利组NO 的含量无明显变化(P0．05)。 5、各组小鼠肾组织内丙二醛的含量在高胆固醇饮食组显著升高(P001)，维生素E 组的丙二醛水平显著下降(PO．05)，依那普利组无明显变化，普伐他汀组也存在降 低丙二醛水平的趋势，但作用强度弱于维生素E组。 6、HE切片显示，高胆固醇饮食组肾小球的病变程度明显重于其余实验组，而普伐他 汀、依那普利和维生索E干预组肾小球的病变程度明显减轻。 组明显增加(PO．01)，而普伐他汀、依那普利和维生素E干预组显著降低(P