重组人血红素加氧酶2的表达、纯化及性质鉴定.pdfVIP

云南农业大学学报　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１３，２８（６）：８０４－８０９ ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｎａｕｅｄｕｃｎ ＩＳＳＮ１００４－３９０Ｘ；ＣＯＤＥＮＹＮＤＸＡＸ Ｅｍａｉｌ：ｘｂ＠ｙｎａｕｅｄｕｃｎ ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１００４－３９０Ｘ（ｎ）２０１３０６００８ ＤＯＩ 重组人血红素加氧酶２的表达、纯化及性质鉴定 周传文，李益鹏，丁　瞙 （复旦大学 生命科学学院，上海２００４３３） 摘要：血红素加氧酶是广泛存在于哺乳动物细胞中的一类氧化酶，催化血红素氧化生成胆绿素，同时生成三 价铁离子和一氧化碳，对调节体内离子平衡，参与机体免疫反应及调节神经系统功能均有重要影响。血红素 加氧酶２（ＨＭＯＸ２）与血红素加氧酶１的功能相似，但分布不同且有着不同的反应动力学，但目前国内外对 其研究较少。本文在获得ＨＭＯＸ２全长ｃＤＮＡ的基础上，将其克隆至高表达载体，通过自动诱导系统表达了人 血红素加氧酶２重组蛋白 （ＨｉｓＨＭＯＸ２）。每升菌液通过ＮｉＮＴＡ亲和层析和ＭｏｎｏＱ阴离子交换层析纯化， １０ 最终约可获得９２６ｍｇ纯度为９２％蛋白质样品。通过酶活检测，其活性可达到６９５１ｕ／ｍｇ，与已报道的血红 素加氧酶活性相比较，我们得到的ＨＭＯＸ２具有与之相当的酶活性。同时，通过改变反应温度 （２０～９５℃）， ｐＨ值 （ｐＨ６～９）等条件，检测了重组ＨｉｓＨＭＯＸ２的催化活性，在温度为４０℃和ｐＨ为８时，其活性最高。 １０ 本研究为将来进一步深入了解ＨＭＯＸ２的生化功能及与相关疾病的关系奠定了基础。 关键词：血红素加氧酶２；原核表达；纯化；酶活 中图分类号：Ｑ５９２１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００４－３９０Ｘ（２０１３）０６－０８０４－０６ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨｕｍａｎＨｅｍｅＯｘｙｇｅｎａｓｅ２ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ ＺＨＯＵＣｈｕａｎｗｅｎ，ＬＩＹｉｐｅｎｇ，ＤＩＮＧＹｕ （ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＦｕｄａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅｉｓａｎｅｎｚｙｍｅｔｈａｔｃａｔａｌｙｚｅｓｔｈｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｈｅｍｅ，ａｎｄｔｈｅｎｐｒｏ ｄｕｃｅｓｂｉｌｉｖｅｒｄｉｎ，ｉｒｏｎｉｏｎ，ａｎｄｃａｒｂｏｎｍｏｎｏｘｉｄｅ．Ａｌｔｈｏｕｇｈｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ２（ＨＭＯＸ２）ｈａｄ ｓｉｍｉｌａｒｏｘｙｇｅｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｓＨＭＯＸ１，ｔｈｅｉｒｃｅｌｌｕｌａｒｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｒｅａｃｔｉｏｎｋｉｎｅｔｉｃｓａｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ． ＣｏｍｐａｒｅｄｔｏＨＭＯＸ１，ｔｈｅｒｅａｒｅｆｅｗｒｅｓｅａｒｃｈｆｏｃｕｓｅｄｏｎＨＭＯＸ２．Ｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ，ｗｅｆｉｒｓｔｃｌｏｎｅｄ ｈｕｍａｎＨＭＯＸ２ｔｏｔｈｅｐＴ７ｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｖｅｃｔｏｒｆｒｏｍｈｕｍａｎｃＤＮＡ，ｔｈｅｎｗｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＨＭＯＸ２ｂｙｔｈｅａｕｔｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨｉｓＨＭＯＸ２ｗａｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙ １０ ＮｉＮＴＡａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄＭｏｎｏＱａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅｔｙｐｉｃａｌｙｉｅｌｄｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨＭＯＸ２ｗａｓ９２６ｍｇｆｒｏｍ１ｌｉｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｗｉｔ