猪新基因_em_PFN3_em_电子克隆、RT-PCR验证和组织表达分析.pdfVIP

云南农业大学学报　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１４，２９（２）：１７９－１８６ ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｎａｕｅｄｕｃｎ ＩＳＳＮ１００４－３９０Ｘ；ＣＯＤＥＮＹＮＤＸＡＸ Ｅｍａｉｌ：ｘｂ＠ｙｎａｕｅｄｕｃｎ ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１００４－３９０Ｘ（ｎ）２０１４０２００６ ＤＯＩ 猪新基因ＰＦＮ３电子克隆、ＲＴＰＣＲ 验证和组织表达分析 １＃ ２＃ ２＃ ３ ３ ３ 张永云 ，赵　跃 ，王　锐 ，秦彩艳 ，王　配 ，王淑燕 ， ４ ２ ２ ３ １ ３ 李福泉 ，刘丽仙 ，霍海龙 ，李卫真 ，卢　健 ，霍金龙 （１云南农业大学 农科专业基础实验教学示范中心，云南 昆明６５０２０１； ２云南农业职业技术学院畜牧兽医系，云南 昆明６５００３１； ３云南农业大学 动物科学技术学院，云南 昆明６５０２０１； ４内江职业技术学院生物技术系，四川 内江６４１１００） 摘要：通过ＮＣＢＩ下载猪近缘物种的ＰＦＮ３基因序列，在线ＢＬＡＳＴ比对获得猪ＥＳＴ序列，利用Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ软件 电子克隆猪ＰＦＮ３基因编码区序列及部分侧翼序列。针对编码区设计特异引物并以滇南小耳猪为研究材料进 行实验验证，同时应用半定量ＲＴＰＣＲ技术对３０个组织进行了表达分析。研究获得了猪ＰＦＮ３４１４ｂｐ的编码 区序列 （ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＪＸ４５７３４８，对应的氨基酸登录号：ＡＦＵ７４０１３）。生物信息学分析表明，该基因编 码１３７个氨基酸，预测的蛋白质分子量 （Ｍｗ）为 １４７３ｋｕ，等电点 （ｐＩ）为９３０。蛋白质结构分析显示， ＰＦＮ３存在１个保守域，无信号肽；疏水性分析表明其 Ｎ端和Ｃ端均具有亲水性；亚细胞定位显示，该蛋白 位于细胞质的概率是９４１％。系统进化分析表明，猪与牛亲缘关系最近。组织表达分析表明，ＰＦＮ３基因在 ３０个被检组织中均有表达，在睾丸、肝、肾、结肠、盲肠、直肠及食管中高表达，在胸腺、甲状腺、附睾、 淋巴结、十二指肠、空肠、回肠、胃、皮肤、大脑、小脑、垂体及下丘脑中中度表达，在颌下腺、肺、心、 脾、肾上腺、肌肉、胰脏、脑干、舌下腺及脊髓中低表达。研究结果将为该基因在猪中的进一步功能研究奠 定基础。 关键词：肌动蛋白结合蛋白－３；电子克隆；滇南小耳猪；生物信息学；组织表达 中图分类号：Ｓ８２８２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００４－３９０Ｘ（２０１４）０２－０１７９－０８ ＩｎＳｉｌｉｃｏＣｌｏｎｉｎｇ，ＲＴＰＣＲＶｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＴｉｓｓｕｅｓ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｏｖｅｌＳｗｉｎｅＧｅｎｅＰＦＮ３ １ ２ ２ ３ ３ ３ ＺＨＡＮＧＹｏｎｇｙｕｎ，ＺＨＡＯＹｕｅ，ＷＡＮＧＲｕｉ，ＱＩＮＣａｉｙａｎ，ＷＡＮＧＰｅｉ，ＷＡＮＧＳｈｕｙａｎ， ４ ２ ２ ３ １ ３ ＬＩＦｕｑｕａｎ，ＬＩＵＬｉｘｉａｎ，ＨＵＯＨａｉｌｏｎｇ，ＬＩＷｅｉｚｈｅｎ，ＬＵＪｉａｎ，ＨＵＯＪｉｎｌｏｎｇ （１ＴｅａｃｈｉｎｇＤｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｏｆｔｈｅＢａｓｉｃＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＭａｊｏｒｓ，ＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２０１，Ｃｈｉｎａ；２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｕｓｂａｎｄｒｙａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ，ＹｕｎｎａｎＶｏｃａｔｉｏｎａｌａ