鸡艾美耳球虫单卵囊分离技术的建立.pdfVIP

维普资讯 动物医学进展 ，2007，28(8)：27—29 ProgressinVeterinaryM edicine 鸡艾美耳球虫单卵囊分离技术的建立 闰鸿斌 ，田广孚，贾万忠，李 辉，才学鹏 (中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室，甘肃兰州 730046) 摘 要 ：以玻璃纸做材料 ，用毛细吸管分离单 卵囊，通过显微镜 “重复 ”鉴定法，对柔嫩艾美耳球 虫 (Eimeriatenella)进行分离。单 卵囊感染 2O只鸡，在感染后 5d～15d，用饱和盐水漂浮集卵法进行检测。 结果显示，有 l5只鸡粪便 中检 出卵囊，经鉴定均为所要分离的虫种 (E．tenella)，感染成功率为 75 ，准确 率达 lO0％。另外，应用改进后的玻璃纸单卵囊分 离技术还成功分离到毒害、巨型、堆型、布 氏、和缓和早熟 艾美耳球虫的单一虫种。结果表 明，改进后的单卵囊分离技术简单易行，感染方便，成功率和准确率都较高， 而且所用材料易于获得 ，消毒方便 。 关键词：鸡 ；球虫；单卵囊分离技术；感染 中图分类号：$852．7 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2007)O8—0027—03 鸡球虫病(Coccidiosisinchicken)是集约化养鸡 禽有限公司，刚出壳即放入专用鸡盒运回，在严格消 业多发、危害严重且防治困难 的寄生虫病之一，造成 毒无球虫育雏伞下饲养 (网养)至试验所需 日龄 ，禽舍 的经济损失十分巨大。据统计，包括防治该病所花的 温度控制在 3O℃～35℃；采用 24h光照；饲喂无球 药费在内，全球每年损失约 2O亿美元 。该病主要危 虫饮水和无球虫、不添加任何药物的全价育雏颗粒饲 害 15日龄～5O日龄的雏鸡 ，集约化鸡场是球虫病暴 料(购 白兰州富昌饲料厂)，自由采食，自由饮水。感 发最适宜的场所，发病率高达 5O96／～7O ，病死率为 染后单独饲养于经汽油喷灯消毒的金属笼内。 2O％～3O％，严重者高达 8O [1-33。公认的鸡艾美耳 1．1．2 材料 次氯酸钠溶液为郑州市德众化学试 球虫主要有 7种，即堆型艾美耳球虫、和缓艾美耳球 剂厂生产，批号为食盐为普通食用盐， 虫、柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、早熟艾美耳球 兰州市盐业公司生产 ；甘油为天津化学试剂有限公 虫、布氏艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫。7种球虫在 司生产 ，批号为重铬酸钾 ：西安化学试剂 卵囊形态、结构、大小、肠道病变、寄生部位、最短孢子 厂，批号为 930923；玻璃纸为硬盒香烟外包装的透 化时间、最短潜伏期等均具有 自身特征，所有球虫均 明薄膜，将大张玻璃纸剪成0．5cm×0．5cm左右的 具有一定的致病性，且经常是混合感染，即同一宿主 小方块 ；尖头毛细管用酒精灯将普通玻璃毛细管中 可以同时感染几种球虫 。近来年 ，国内外学者对鸡球 部烧至软化，用镊子夹住未烧软的一头，轻拉至细， 虫种的鉴定、遗传变异、球虫活疫苗、基因工程苗n≈] 待冷却后断开即可；眼科镊子、尖头吸管、玻璃纸和 及球虫耐药性[4]等方面进行 了大量研究工作 ，但基 载玻片 ，在恒温箱 120℃加热 Ih～2h，杀死可能污 因型纯净、单一的卵囊是这些工作顺利开展的前提和 染的球虫卵囊。 基础。单卵囊的分离纯化，对进一步研究球虫的致病 1．2 方 法 力、耐药性、免疫性及其相互作用机制、抗球虫药的开 1．2．1 球虫卵囊来源和卵囊收集 收集兰州某鸡 发、疫苗的研制及球虫分子生物学和免疫学研究都有 场带血鸡粪及死于鸡球虫病的鸡肠道 内容物 。取一 重要意义。因此，有必要寻找一种简便、实用、准确而 部分鸡粪漂浮镜检，可见有许多大小不一的球虫卵 且经济的单卵囊分离技术。 囊 。将 鸡 粪 捣 细 后 加 适 量 水，离 心 2 次 1 材料与方法