小麦AGPase胞质型基因LSU Ⅰ的克隆及正义、反义与RNAi干扰载体的构建.pdfVIP

维普资讯 浙江大学学报(农业与生命科学版) 33(6)：607～615，2007 JournalofZhejiangUniversity(Agric． LifeSci．1 文章编号 ：1008—9209(2007)06—0607—09 小麦 AGPase胞质型基因LSUJ的克隆及正义、 反义与 RNAi干扰载体的构建 康国章 ，张孟琴 ，官春云 。，郭天财 ，朱云集 (1．河南农业大学 国家小麦工程技术研究中心，河 南 郑州 450002；2．河南科技大学 林业职业学院，河南 洛阳 471002 3．湖南农业大学 农学 院，湖南 长沙461012) 摘 要 ：采用 RT-PCR方法从 小麦 品种豫教 2号的发 育籽粒 中克隆 出AGPase胞质型大亚基基 因 (1argesubunit，LSUI)的 cDNA全 长 (1947bp，GenBankNo．DQ839506)，同源性 比较 结果表 明，与 GenBank上 已报道的LSUI基 因同源性达 99 ，虽与其有 2处碱基不 同(与 Z21969相比，分别在 851bp 处的T变为 C和926bp处的 G变为A)，但他们 的氨基酸序列相 同，故不影响其功能．以pBI121质粒为 基础，通过 中间栽体 pBSK，构建了由35S启动子调控的LSUI基 因的正义表达载体 pBI121LSU IS；将 该基 因反 向置于 pBI121质粒 的caMV35S启动子之后 ，构建 了LSUI的反义表达栽体 pBI121LSU IA． 同时还克隆出LSUI基因的250bp片段 ，以pFGC5941质粒为基础 ，构建 了RNAi干扰栽体pFGCLsuI，这 为研 究该基 因的功能打下 了很好 的基础 ． 关 键 词 ：普通小麦 ；AGPase胞质型大亚基 ；表达载体 中图分类号 ：Q785 文献标识码 ：A KANG Guo～zhang ， ZHANG Meng—qin ， GUAN Chun—yun 。， GUO Tian-cai， ZHU Yun—ji (1，NationalEngineeringResearchCentreforWheat，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou 450002，China 2．CollegeofForestryVocation，HenanSci—TechnologyUniversity，Luoyang，Henan 471002，China 3．CollegeofAgronomy，HunanAgriculturalUniversity，Changsha410012．China) MolecularcloningofAGPaselargesubunit I geneand construction ofitssense，antisenseand RNAi expressionvectors．JournalofZhejiangUniversity(Agric． LifeSci．)，2007，33(6)：607—615 Abstract：TostudythefunctionofAGPaselargesubunitIgene(LSUI)insynthesisofstarchinwheatplants， fullcDNA sequences(1947bp)ofaLSUIgene (GenBankNo．DQ839506)wereclonedfrom grainsof commonwheat(Triticum aestivum，Yujiao2cultivar)withRT-PCR，anditssense，antisenseandRNAi vectorswerealsoconstructed．ThecodingregionsofLSU 1were1569bp(from 117—1685bp)，which shared highhomogeneitywith Z21969genesequences．TheclonedLSU I g