虎杖愈伤组织的诱导及提高白藜芦醇含量的初步研究-.docVIP

学位论文 虎杖愈伤组织的诱导及提高白黎芦醇含量 的初步研究 梁莉 指导教师 学科专业 研究方向 2007年6月及亡几“ anAgriculturalUnivers抑 DISSERTATION SubmittedinPartialFulfillmentofRequirementfor MASTERDEGREE StudiesoneallusofPolygonumCusP翻陇 tumandResveratrol By LIANGLi Drieetedby ASSOCisteP邝 f.NVENrlho (CroPFarmingSystemandCultivation) Ya’an，Siehuan，P.R.China，625014 May，2007 /论文独创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或 集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学 位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中 作了明确的说明并表示了谢意。 研究~’津今州年‘月那 关于论文使用授权的声明 本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式 在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 研究生签名: 导师签名: 梁角 及i为 川年‘月心 叫年了月硒日 飞中文摘要 虎杖 (Polygon四CusPjda。二siebe。:ucc)为寥科萝属多年生草本植物，为常用 中药。其主要活性成分白黎芦醇(Resvera汀o1)是一种天然抗毒素，是目前研究较为 热门而被认为是最有希望的天然化学防癌剂之一。本文以虎杖地上茎和叶为材料，诱导 愈伤组织，建立了离体无性繁殖系，研究了愈伤组织中白黎芦醇的提取工艺，不同外植 体、培养基、光照强度及前体物质对愈伤组织的生长和白黎芦醇含量的影响。主要研究 结果如下: 1用正交实验研究了溶剂种类、时间、温度对白黎芦醇提取率的影响，极差分析结果显 示，提取温度是提取工艺过程中最重要的因素，其次是提取时间，而提取溶剂对白黎芦 醇提取率的影响最小。综合评价各指标，用乙酸乙酷在4℃下提取48h效果最佳，虎 杖愈伤组织中白黎芦醇的产量可达到 13.241pg·g一，。 2通过研究外植体和培养基对愈伤组织的影响，了解到以茎段作为外植体时诱导出的愈 伤组织生长比叶片快，且其中的白葬芦醇含量为叶片中的5倍;MS培养基上的愈伤组织 增殖最多，其茎段和叶片的鲜重增长率均极显著高于N6和B5培养基，分别达到了141.0 %和73.8%，但白葵芦醇含量略低于B5培养基。因此，以MS为基本培养基，虎杖茎段 为外植体诱导出的愈伤组织成愈较高，生长旺盛，维持时间长，白黎芦醇含量高，优于 其他处理。 3将茎段诱导出的愈伤组织，分别于暗光 (0lx)、弱光(1340一 1560lx)、强光(3110~ 3310lx)三个条件下进行培养，结果显示，愈伤组织的生物量随着光照强度的增强而增 加，强光培养下愈伤组织的生物量达到了53.6829·L一IFW，较暗光下高25%，但仅比弱 光下高出0.4%。白黎芦醇含量与光照强度未成正相关，弱光培养下，愈伤组织中白葬芦 醇的含量显著高于另外两个处理，为140.074陀.9一IDW。可见，虎杖愈伤组织对光敏感， 以弱光培养效果最好。 4添加10一 30mg·L一，浓度的前体物质苯丙氨酸后能促进愈伤组织生物量的增殖，且表 现为 20mg·L一‘处理下生物量增殖最多。用Richarde方程模拟了愈伤组织的生物量在一 个生长周期内的动态积累过程，发现在不加前体物质的情况下，可以得到稳健、可靠的 估计，前体物质在一定程度上调节了愈伤组织的增长情况。由生长速率参数(K)可知， 随着苯丙氨酸浓度的增加，愈伤组织增长速度加快，极显著高于对照，高出16.5倍以上。 5添加前体物质苯丙氨酸能诱导苯丙氨酸裂解酶活性的增高。各处理的PAL活性的变 化趋势基本一致，都在培养的第7d达到最大值，PAL的活性表现出随着添加的苯丙氨 酸浓度的增大而升高，A3处理达到最大值，为97.ORu百IFw，较cK高出81.6%， A2处理较CK高出75.6%，仅Al处理低于CK，与其他处理达到极显著差异。7d后， 苯丙氨酸裂解酶活性迅速下降，并不再回升 6添加前体物质苯丙氨酸对愈伤组织中的可溶性蛋白含量无显著的影响。在一个生长周期内，可溶性蛋白在第14d一21d出现最大值，各处理间未