大鼠β防御素2基因在呼吸道的表达调控及转基因研究.pdf

大鼠B一防御索·2基因在呼吸道的表达调控及转基因研究一中文摘要 大鼠B．防御素．2基因在呼吸道的 表达调控及转基因研究 研究生： 周 慧 导师： 王伯瑶 中文摘要 内源性抗菌肽是天然免疫的重要介质，是炎症反应起保护作用的 重要分予基础。B。防御素是新近发现的抗菌肽家族成员之一，在粘膜 上皮广泛表达，包括气道和粘膜下腺体上皮细胞，是粘膜防御系统的 重要介质。B一防御素是阳离子碱性小肽，具有广谱抗微生物活性，对 细菌、真菌和包膜病毒均有效，还可作为趋化因子连接天然免疫和获 得性免疫。人的B．防御素一l、．2、．3均可在气道上皮细胞表达，在呼 吸道的粘膜防御屏障中具有重要作用。b．BD．1、b．BD．2和b．BD．3在呼 吸道均可被细菌或炎症预激因子等诱导表达。增加局部抗菌肽的浓度 是治疗呼吸道耐药菌的一个方法之一，特别是对肺囊性纤维化(CF) 病人。研究呼吸道上皮细胞抗菌肽的表达调控机制及其抗感染作用， 不仅具有重要的理论意义，且可为发展新的抗感染措施作出重要贡 献。 本研究的目的是以大鼠为动物模型研究D．防御素．2基因在呼吸道 的表达和大肠杆菌培养上清对其基因表达的影响，并评估D．防御素一2 基因转染及BCG胞壁蛋白组分能否增强大鼠的抗感染能力。 大鼠B一防御素-2基因在呼吸道的表达调控及转基因研究一中文摘要 提取不同发育阶段大鼠肺组织的总RNA，RT．PCR检测显示从足 月胎鼠、出生8小时和4天以及成年大鼠肺组织中均检察到相同 强度的p．防御素．2mRNA信号，提示大鼠p．防御素．2基因在肺组织 表现为固有表达。本实验室已有的研究显示大肠杆菌ML．35p株气道 接种后可显著抑制大鼠肺组织rBD。2mRNA的表达，本实验进一步表 明大肠杆菌ATCC25922及其上清均可降低肺组织rBD．2mRNA的表 达， 说明具有抑制其基因表达的活性物质可能存在于大肠杆菌的分 泌物中。 目前抗菌肽的抗菌作用大多是用体外实验证明的，本研究试图用 转基因方法以增强抗菌肽在呼吸道的表达，评估其在体内的抗感染作 细胞内表达，且具有抗菌活性：rBD一2重组质粒经气道转染后大鼠肺 组织对绿脓杆菌的清除率明显高于对照组(n=8，P=0．003)。 体外培养的人肺腺上皮细胞6．防御素．1和LL．37mRNAs表达增高和 抗菌活性的增强。本研究评估了BCG的这一抗菌肽基因激活组分是 否能增强呼吸道抗感染防御功能。经腹腔注射BCG胞壁蛋白活性组 分48小时后，由气管滴入绿脓杆菌制备大鼠肺感染模型，结果显示 卡介苗胞壁蛋白抗菌肽基因激活组分可明显提高肺组织对绿脓杆菌的 清除率(n-8，P=0．004)。 人鼠B一防御素-2基因在呼吸道的表达调控及转基因研究一中文摘要 关键词 呼吸系统；大鼠B一防御素一2：基因表达调控；大肠杆菌；卡 介苗胞壁蛋白组分；粘膜转基因 Studiesonthe ofRat13-Defensin一2Gene andGene Regulation Expression Transfer in Tract--Abstract Respiratory Studiesonthe of Regulation Rat[3-Defensin一2 Gene andGeneTransferin Tract Expression Respiratory Hui Postgradute：Zhou Supervisor：WangBoyao