干扰素作用下乙型肝炎病毒C基因区变异机制的体外研究及HepG2215细胞在研究中的应用.pdfVIP

2 1 r{尤票作用F己盯蜒毒C基冈区变异机制的体外研究及IlepG25细胞在研究中的鹰斤】 中文摘要 干扰素作用下乙肝病毒C基因区变异机制的体外研究 及HepG2．2．15细胞在研究中的应用 专业：消化内科学 硕士研究生：邵光 导师：周晓东教授 摘 要 研究背景 乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的一种世界性疾病，据统计全球HBV慢性 携带者的总数超过3．5亿。我国是乙型肝炎的高地方流行区，感染人数约占世 界感染人数的50％，HBV的慢性感染与各种肝病的发生有着密切的关系，可 导致慢性活动型肝炎、肝硬化，肝细胞癌等疾病的发生[1]。乙型肝炎病毒在 其慢性感染过程中可以发生基因变异，引起变异的原因，一是由HBV自身分子 生物学特性决定，乙型肝炎病毒属于嗜肝DNA病毒科的原型病毒，其基因组 复制要经过RNA中间体的逆转录，表现为与逆转录病毒相似特性，况且4在反 转录过程中，RNA一缺乏校对酶活性，不能修正核苷酸的错配，其变异率高于 其他DNA病毒约四个数量级，替代率约2．1×10000／碱基／轮；二是由宿主特异 性免疫应答及抗病毒药物治疗所致。因此HBV的基因突变包括自然突变和人 工突变两种，HBV在患者体内或体外培养的情况下，在各种因素的选择压 力下都可能产生突变，突变可以导致免疫逃避．耐药株出现．毒力的改变，持续感 染等后果，与乙型肝炎慢性化、肝细胞癌、肝硬化、重型肝炎等的发生有着密 切的关系，因此HBV基因变异与耐药机理的研究一直是HBV研究的重要课 题。 IFN．Ⅱ是目前国内外公认抗乙型肝炎病毒(HBV)作用较好的药物，为治疗 DNAIj)]转率约40 乙型肝炎的主要药物之一。IFN对乙型肝炎HBeAg及HBV ’奉研究由国家科技部973计划项目G1999054105赞助 【 2．I 下扰素忤ILJF己1¨_病毒c基训匹变异机制的体外研究及J|cpG2 5细胞在研究中的应用 中文摘要 疗后有应答者(HBeAg及HBVDNA阴转)预后较好[2]，可以减少肝硬化及肝 细胞癌的发病率。临床研究发现经干扰素治疗的乙肝患者会出现HBVC基因 区，前c区， c基因启动子突变，关于干扰素作用下HBV的突变机制，大 多数学者通过临床观察认为是HBV逃避机体免疫压力的结果，但是有学者研究 发现c基因热点变异区均不在MHC限制性CTL识别区，最常见的L97替代 甚至与已知的T或B表位无关，因此将干扰素治疗后新产生的HBV变异完全 归凶于免疫因素是不严谨的。鉴于上述，我们去除免疫因素的影响，采用细胞模 型就干扰素作用下乙肝病毒C区，前c区的突变规律及机制展开系统的体外 研究，以探讨干扰素直接抗病毒作用与HBV变异的关系。前期的试验结果表 因插入或缺失突变株，突变株与优势株相比基因序列同源性在97％以上，因 此，可以认为该突变株与优势株同源．；2．hlFN．a可通过直接分子作用机制影 HBV的cccDNA转录后调节机能，导致前C／C基因结构的 响HepG2．2．15 HBV优势株度 改变．同时，也可能通过直接病毒抑制作用，抑制HepG2．2．15 的复制，从而导致突变株比例相对增加；3．存在HBV异质性HepG2．2．15细 胞系可作为HBV变异分子机制研究的理想细胞模型，这种细胞模型内存在 异质性的现象可能会影响其在基因治疗中的应用。本实验在前期工作的基础 上进一步探讨干扰素真接抗病毒的分子机制及其致HBV变异机制及 HepG2．2．15细胞在HBV基因变异机制研究中的应用价值。 研究目的： 1．用不同剂量IFN常时间作用于HBV分泌型HepG2．2．15细胞培养株；通过定 白合成及病毒复制的影响；通过测序