聚乳酸聚乙醇酸PLGA微球佐剂的研究.pdf

中国医攀科攀陇中国协和医料大举娜士攀位论文 聚乳酸聚乙醉酸(PLGA)微球佐剂的研究 傲 孙 聚乳酸 (PLA).聚乙醉酸及其共聚物 (PLOA)等聚脂类材料作为免 皮佐剂，具有生物相容性好、可生物降解吸收、级释控释作用明显、增 强原‘免原‘性等优越”，一直是国外研究“佐“”的热点·卜在其制 备工艺、对不同蛋白、细曲或病毒的作用的差异性等方面还存在问题。 尤其是在近两年才发展起来的荃因免疫佐剂方面其作用十分明显，但其 作用机理还不明确.为此痴有针对性的进行了研究和探索;本文的 工作主要包括以下几个方面. 一、卵清白蛋白(OVA)微球的制备屯鉴定及其体外释放动力学的研究。 以OVA为模拟蛋白制备徽球来研究其特性是国外研究地最广泛 和最深入的，我们进行这一研究的目的是为了掌握其制备工艺探索其 最佳的制备条件，并进一步改，其制备工艺中的不足恤·据实际条件 我们采用溶剂蒸发法来制备徽球，并通过改变各种制备条件来探索其 最佳的制备条件，实现了徽球粒径大小均匀、包裹率高等目的。对其 体外释放动力学的研究是依据其在体外棋拟条件下的释放动力学推测 其在体内条件下的释放动力学，近而研究其作用机理。我们的结果与 国外研究的结果相似，即 性释放，后由其降解速度决定其释 放速度。 二、荃因工程乙肝表抗(仙sAg)徽球的制备鉴定及动物免痊的研究。 前面徽球的制各条件，制备羞因工程乙肝表抗徽球，通过 子显徽愧的观察和检侧，徽球的平均粒径是4,SUm,表面 有小的央起及沟和相，徽球形状比较规则.通过对徽球进行降解并用 BCA蛋白含f检侧试剂盒检侧，徽球对HbSA.的包裹率为72A%. 中国层举科攀院中国协和医料大举博士举位论文 通过SDS-聚丙烯酷胺凝胶电泳和确下TERN 印迹法检洲证实，徽球 包裹对HbsAg的分子f没有影响，也没有破坏其免41原性.免疫Ball 小暇后，取血清及肺琳巴细胞进行抗体水平和抗原刺激的淋巴细血si 结果显示.免痰初期徽球免疫组的抗体水平比侣佐剂免疫组 的抗体水乎低很多，中期羞本相同，在免痊后近一年时徽球免疫组的 抗体水平比侣佐荆免痊组的抗体水平要高。徽球免痰组的抗服刺橄的 琳巴细胞增生指效比铝佐剂免痊组的商很多。 乙肝表扰墓因徽球的制备鉴定及动物免疫的研究。 冬们通过引物设计、PCR扩增、”脂，。。电泳等分子生物学 方法，利用pRc-CMV真核表达载休，制备了含有乙肝表抗墓因的真 核衷达载体.通过醉切鉴定和测序证实所克隆的基因正确:用磷酸钙 法将质粒载体转染COs一细胞进行体外瞬时表达，通过ELISA和荧 光标记抗体检侧，证实表达载体系统完整，能表达HbsAg.将质粒 载体与空徽球混合孵育后免疫Balb/c小鼠，取小鼠血清和脾淋巴细 胞并分离出T琳巴细胞，分别检测抗体水平、抗原刺激的淋巴细胞 增生、细胞毒T细胞特异性杀伤靶细胞，并应用FITC标记的单扰检 侧脾琳巴细胞中CD4,CDVT细胞的相对含到 结果显示。徽球注 射组的杭体水平远高于裸DNA注射组，几乎接近铝佐剂十HbSA9注 射组的抗体水平:徽球注射组的抗原刺橄的淋巴细胞增生指数也高于 裸DNA注射组和铝佐荆+HbsAs注射组:细胞毒T细胞特异性杀伤 率徽球注射组的最高;在免疫后CD4T琳巴细胞先增加后降低，而 CDM 细胞持续增加. 关妞切: 耘醉靓其共瀚俄形劣-‘徽球 DNA免疫 细NOT细胸吧 乙肝表抗 中国医举料学院中国协和医科大学协士学位论文 STUDIESONADJUVANTSOF POLY (D,L-LACTIDE-CO-OLYCOLmE)