水稻苗期部分旱胁迫早期应答基因片段获得及CDS扩增.pdfVIP

水稻苗期部分旱胁迫早期应答基因片断获得及CDS扩增 摘 要 在我国，尤其是北方，干旱是影响作物生产的最严重因素。虽然从五十年代起，抗旱机 理的研究一直是研究的热点，且各种抗旱的形态生理指标被提出来。但这些指标在实际运用 中效果并不理想，因而从分子水平上研究抗早机理不但非常必要，而且还非常迫切。 在分析以前干早研究的经验教训后，本研究采用不同的研究思路和方法开展。同时.为 增加研究的实用性，本研究采用目前在人田生产上应用的抗旱性较强的陆稻品种早稻 297 为材料。取得的成果如下: I. 本研究为避免研究干早的众多影响因素，设计了一个温度，光照和湿度都可控 的环境，以保证基因的变化由单一因素引起。虽然人工环境与大田有许多差别 但可作为研究干旱的一种模式。 2 以二时一心期的水稻幼苗为材料。采用0.9*/.NaCl,15%PEG和干旱二种方法处 理，于3小时取样，比较三种情况下获得的差异片断的异同，目的在于获取干 早胁迫信号转导上游对干早胁迫应答，同时又对NaCl和PEG不应答的基因， 3， 对现有获得差异荃因片断的方法进行了改进，删除了基因鉴定综合法中繁杂的 验证步骤，增加了扩增片断的长度，使方法更为简洁，同时假阳性得到进一步 降低。在直接干早处理3小时的水稻幼苗中，通过简化的基因鉴定综合法得到 了只对干早胁迫应答，而对。.9%NaCl和15%PEG不起反应的4个EST,除I 个功能不能判别外，其余分别与果胶甲脂阵、二磷酸核酮精狡化酶，锌结合蛋 白基因相关。 4. 根据基因家族的保守序列来设计引物进行RT-PCR的结果获得了7个只对干 早胁迫应答，而对0.9NaCl和15%PEG不起反应的EST，分别与1,5一二磷酸核 酮衡狡化醉、寡肤醉、天冬曦胺蔺、脱落酸反应元件结合因子、 12-0xo-phytodienoate还原醉荃因相关。现己知1,5磷酸核明箱筱化酶、脱落 酸反应元件结合因子荃因与植物抗早相关。本研究表明.它们在植物胁迫3小 时即己表达. 5， 为了探索获得更经济，更方便的克隆基因全长的方法，尝试了对基因编码区 (CDs)的扩增。根据每个基因的第一个翻译起始密码为AUG的原理.我们设计 引物对基因的CDS进行扩增.对基因的CDS扩增尝试表明，方法虽有许多缺 陷和许多尚需改进的地方，但很有可能获得塞因的CDS 关键词:水稻.早胁迫，应答基因，CDS Abstract InChina,especiallyinNorthChina,droughtisoneofthemostseriousfactorslimitingcrop productivity.Althoughresearchondroughtresistantmechanismhavebeenahotspotacross50 years,andalotofmorphologicalnadphysiologicalindexesfordroughtresistancehavebeenput forward,buttheseindexesarenotperfectinpractice.Soresearchondroughtresistnatmechanism inmolecularlevelisnotonlynecessary,butalsoexigent. Afternaalyzingtheexperienceandlessonofformerresearchondroughtresistance, this research adopteddifferentresearchwaysandmenas.Toincreaseresearchpracticability,a uplandricestrain,RanDao297,whichhasstrongdroughtresistantcharactersnadalsohasbeen appliedintheproduct