百脉根侧生器官边界形成分子机制初步研究.pdf

百脉根侧生器官边界形成的分子机制初步研究 摘 要 不同种属植物的叶在形态上千差万别，了解叶的形态结构，在进化上和经 济上都有重要的意义。叶发育的研究在过去的十年里取得了很多进展。一些关键 的叶发育过程已经被研究了。例如，叶原基奠基细胞的招募、叶原基属性的决定 和叶原基的伸长与分化。复叶的研究进展大都源于模式系统——番茄和豌豆。但 是复叶的小叶原基形成后，它们之间的边界形成机理却研究的很少。 我们以豆科模式植物百脉根为研究系统。两类影响到小叶边界形成的突变 体为我们的研究对象。第一类突变体^“只特异地影响到复叶上部的三片小叶间 的边界形成。而第二类突变体uml广泛的影响到侧生器官边界的形成。 遗传分析表明：而』』突变体是由一个稳定遗传的隐性单位点核突变引起的。 扫描电镜的研究表明，在小叶原基起始时期，也就是P3期之前，妇J』突变体中 小叶原基的起始方式与野生型的完全一样。这暗示突变体的发育异常是发生在 P3期之后，扫描电镜的结果也显示：侧部小叶原基与顶端小叶原基之间的边界 区域，在发育上明显落后于同一时期的野生型。通过图位克隆，再结合比较基因 组学的方法，我们克隆了FULl基因。序列分析表明：突变体衄』，一』在LjCUCl 的起始编码框ATG下游196位上的碱基由胞嘧啶(C)转换为胸腺嘧啶(T)，这 种变化使得66位上保守的脯氨酸变成丝氨酸(P66S)。突变体力』，叼在／．jCUCl 的起始编码框ATG下游的937位上的碱基由胞嘧啶(C)转换为胸腺嘧啶(T)， 这种变化使得读码框中编码第313位谷氨酰胺的CAG变成了终止密码子TAG。 这也进一步验证了遗传的结果：妇』』一J突变体是而』，叼的等位突变体。RT—PCR 的结果也显示而』卜』突变体中LjCUCl的表达下调了。原位杂交的结果显示： ￡J况研在小叶原基之间的边界区域表达：同时还在花器官原基的边界区以及胚 珠之间的位置检测到了LjCUCl的表达。所有的这些结果都强烈显示而』』突变体 暗示miRl64可能参与到LSUCl转录水平的调控。 第二类突变体uml也是一个稳定遗传的隐性单位点核突变。在“mz突变体 中，有融合的子叶和其它融合的侧生器官。通过图位克隆的方法，我们克隆了 位上的碱基由胞嘧啶(c)转换为胸腺嘧啶(T)，这种变化使得517位上保守的 精氨酸变成色氨酸(R517W)。LjPTNl编码一个生长素跨膜转运蛋白。这些结果 显示生长素也参与到侧生器官边界的形成。除了复叶的表型外，uml突变体的表 型与拟南芥pj脚突变体的表型非常相似。而』Juml双突变的表型比向-，单突 变的表型明显增强；遗传的结果显示LjCUCl和LjPINl是以两条独立的机制控 制着侧部器官边界的形成。 关键词：百脉根，复叶，而J』突变体，uml突变体，边界形成 I】 onthe oflateral in Primarystudy formation boundary organs Lotusjaponicus Chen(Genetics) Jianghua DrDaLuo Directed by Varies AbstractThe ofleaf indifferent is morphology dramatically species．which and hasmade advancesinthelast evolutionalIyeconomicallyimportant．Leafdevelopmentgood decadeIth