旋毛虫肌幼虫特异性诊断抗原的研究.pdfVIP

旋毛虫肌幼虫特异性诊断抗原的研究 硕士学位申请人 张灯 推荐导师 王中全崔晶 郑州大学基础医学院奇生虫学教研室 (郑州450052) 河南省分子医学重点学科开放实验室 (郑州450052) 摘 要 有旋毛虫幼虫囊包的猪肉或其他动物肉类所致。目前全世界大约有1100万人体旋毛虫 感染者，国际旋毛虫病委员会(InternationalCommissionoil 省市区发生548起人体旋毛虫病暴发。河南省为全国旋毛虫病的高发区。本病不仅严重 危害人体健康，还可造成巨大的经济损失。但目前对本病尚无满意的诊断方法，确诊本 病主要靠肌肉活检，但在轻度感染者和感染早期往往不易检出，且不易被患者接受。因 此，国内外学者对旋毛虫病的免疫学诊断进行了大量研究，但所用的诊断抗原多为旋毛 虫成囊期(肌肉期)幼虫虫体粗抗原，由于抗原成份复杂，用于本病患者的免疫学诊断 时常与其它寄生虫病(如并殖吸虫病、华支睾吸虫病、同本血吸虫病及囊虫病等)有交 叉反应而出现假阳性，不能取得特异性诊断。为了寻找诊断旋毛虫病的特异性抗原，本 分进行了分析，然后用旋毛虫病和其它寄生虫病患者血清及正常人和小鼠血清进行免疫 印迹(Western blot)。此外，为了鉴定出引起交叉反应的抗原，还对卫氏并殖吸虫及华 支睾吸虫成虫可溶性抗原组分进行了分析。 将旋毛虫肌幼虫、卫氏并殖吸虫成虫和华支睾吸虫成虫分别研磨、超声破碎、冷浸、 反复冻融、离心，制备虫体可溶性抗原；将旋毛虫肌幼虫在无血清的1640培养基中于 积层胶。充分染色、脱色后可看到各自不同的电泳带。根据标准分子量蛋白带的迁移率 及其分予量的对数绘制标准曲线，测量各条蛋白带迁移率，查出与其对应的分子量。然 后将各种抗原用Westernblot分析。SDS．PAGE电泳及Westernblot结果如下。 1．电泳样本蛋白含量的选择：加样孔内蛋白含量的不同，电泳带清晰度有所差异： 高的1／4处时电泳效果最好。 2．肌幼虫可溶性抗原分析： 旋毛虫肌幼虫可溶性抗原有29条蛋白带，主要分子 17、16kDa。 3。培养不同时间的肌幼虫ES抗原分析：旋毛虫肌幼虫培养不同时间后得到的Es 12、1 Es抗原中相同分子量蛋白的浓度也有差异，随着培养时间的延长，l 10、108kDa 蛋白浓度逐渐降低，53、49、45 ES抗原中未发现的蛋白带为82、77、71、43、32kDa，其中82、32 kDa蛋白通过免疫 印迹证实不具有抗原性。在18h h ES抗原中存在而在21—30 ES抗原中未发现的蛋白带 为95kDa。 4．肌幼虫可溶性抗原与ES抗原的比较；旋毛虫肌幼虫Es抗原与可溶性抗原相同 抗原较可溶性抗原蛋白带少。在肌幼虫Es抗原中存在而在可溶性抗原中未发现的蛋白 kDa。 5．肌幼虫可溶性抗原与ES抗原中特异性组分的鉴定：在旋毛虫肌幼虫可溶性抗原 中只与旋毛虫感染的大鼠、小鼠及患者血清发生反应而不与其他寄生虫(并殖吸虫、华 支睾吸虫、R本血吸虫及囊虫)感染的动物或患者血清及正常人和小鼠血清发生反应的 原。18h kDa和30h ES抗原中的23 ES抗原中的7l、23 kDa蛋白组分只与旋毛虫感染 的大鼠、小鼠及患者血清反应，而不与其它寄生虫感染的动物或患者血清及正常人和小 0鼠