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小麦高分子量麦谷蛋白14和15亚基的研究 摘 要 小麦高分子量麦谷蛋白((HMWglutenin)14和15亚基存在于我国优质面包小麦 小堰六号、陕225等品种中，并被认为与面包加工品质密切相关。本文从蛋白质和核 酸两个方面对 14和 15亚基的来源及分子标记进行了深入探讨，克隆了五种HMW-GS 亚基基因及三种HMW-GS启动子，以期为分子标记辅助育种和通过转基因改良小麦加 工品质奠定基础。 1,14和15亚基来源分析。通过SDS和PCR分析了小僵六号中14和15亚 基的来源，从蛋白质和核酸两方面否认了14和15亚基来源于长穗堰麦草的可能性， 而其亲本中的一些国外品种可能是14和15亚基的真正源头。并发现堰麦草中存在不 同于普通小麦的高分子量麦谷蛋白亚基。 2、建立了扩增高分子量麦谷蛋白的PCR体系，并找到可以区分含14+15亚基品 种不含4+‘15亚基品种的引物吵·于高分子量麦谷蛋白基因内部存在重复序列，通常 的条件下PCR效率非常低，且会出现非特异性扩增，因而需要对PCR体系进行了优化。 通过加入甜菜碱和DMSO建立了扩增HMW-GS稳定的PCR体系，并使用该体系找到了两 对可以在不同品种间呈现多态性的引物。使用引物对SLO132/SLO35从含14+15亚基 小麦品种中扩增到了特异的高分子量麦谷蛋白条带。该条带可以作为追踪 14和 15 二甘、八，。:， _taI‘-Y。。二八二。。。 ‘*、 )尸刁 亚基的分子标记，该引物可应用于分子标记辅助育种夕厂’ 3、克隆了五种麦谷蛋白亚基基因，其中包括首次克隆的14亚基基因HMW-B14. (将从刁堰六号中扩增到的三种PCR产物、从棉优二号中扩增到的一种PCR产物及从 GABO中扩增到的一种PCR产物连接入pGEMT-easy载体。得到了HMW-A1,HWM-B14, HWM-B12,HMW-D10,HMW-A2*五种克隆。测序得到了前4种克隆的5’和3’序列和第 五种克隆的5’序列。序列比较分析结果表明HMW-A1为lAxl亚基，HMW-Bl2为1Dyl2 亚基，HMW-D10为1Dy10亚基，HMW-A2*为lAx2*亚基泪MW-Bl4为1Bxl4亚基。HMW-Bl4 不同于其它己知的HMW-GS.在N一端保守区HMW-GS一般有3-5个半胧氨酸残基，而在 HMW-B14中只有一个半肤氨酸，其中两个半胧氨酸残基变为酪氨酸。HMW-Bl4的蛋白 序列和HMW-GS14N一末端测序结果完全一致.从N一端和C-端的蛋白序列来看HMW-Bl4 为碱性蛋白，其等电点约为9，这和蛋白性质分析的结果完全一致。HMW-Bl4在面筋 形成中的交联方式和其对品质的贡献需要更多的实验支持。夕、一 4、克隆了三种高分子量麦谷蛋白亚基基因的启动子片段。叭CHEYENNE的基因组 DNA为模板，用引物SL0255/SLO256扩增到了三种产物，将PCR产物克隆到pGEMT-easy 载体，筛选得到HMW-P-1,HMW-P-2,HMW-P-3三种克隆。从SL0256引物端测序，序 列比较发现HMW-P-1和HMW-P-2的序列基本相同，而HMW-P-3与其它两个相比有766p 的缺失。) ‘ 关U}:小麦;高分子量麦谷蛋白;加工品质;少和，5亚书 基因克隆; 讲·化):启‘动子 StudiesonWheatHigh-Molecular-WeightGlutenin Subunits14and15 Postgraduate:FanSanhongTutor:Prof.GuoAiguang Abstract ThroughtstudyingHMW-GS compositionofXiaoyan6anditsparentsby SDSandPCR,itwasdiscoveredthattwoparentsST2424/464andXiaoyan96have subunits14+15.AlthoughsomeresearchersbelieveelongateElytrigiaistheoriginofthem. Thisstudyshoweditwasnotarightconcl