Aβ42及其亚单位疫苗接种BALBc小鼠免疫学效应和预防Tg2576鼠病理变化与认知退化研究.pdfVIP

胡金寐博士论文 中文摘要 AB。。及其亚单位疫苗接种BALB／c小鼠的免疫学效应 穗预防T92576鼠病理变化与认知退化的研究 专 业： 人体解剖与组织胚胎学 薅±黛： 龌金家 指导教师：姚恚彬教授 摘要 研究背景和目的 蕤藿天强寿玲魏增长，瓣尔茨海熬癌(Alzheimer’s disease，AD)秘患病 率明最增高，老年痴呆的预防和治疗为医学科学急待解决的难题。近年来研究表 明B一淀粉样蛋白(辱一amyloid protein，Ae)在阿AD的病理发生枧制中发挥 主要终矮，设诗疆磊莽蔻耗豹药黪治疗爨是滏疗豹重要途径。 1999年Schenk姆首次采用A 0。：肽疫苗治疗转基因AD横烈鼠(PDAPP鼠)， 发瑗A§默疫茁可减少转基因AD禳型鬣弦内轰§静沉瑷，减少穗延缓老年斑戆 (senile plaques，SP)形成，引起医学界的烈大震动和广泛关注。随后其他实 验室也搬道同时用主动和被动免痰的方法都可降低AD转基阑鼠脑中的Ap沉积， 进行了临床试验，庄临床IIa期试骏时，出于6％的病人接种厢出现颅内感染，实 验被迫停止。对颅内感染的可能原闲，随后实验进行了研究和探讨，认为①m1792 免疫羼，譬l起细怒秘体液免疫反应，激活鹰内豹小荻蒺纲憨秘篌遴受疫筵系统分 泌炎性细胞因予，造成脑内炎性症状，在清除Ap肽的同时，也损害了神经元和 胡金家博士论文 中文摘要 神经纤维；②由于AB肽本身是一种毒性片段，可导致氧化过激反应、神经元凋 亡、胆碱能神经元直接损伤；③ANl792所用佐剂为Q521，主要引起Thl免疫反 应，促进脑内炎症的发生，也存在一定的溶血作用；④认为AB肽在脑血管内的 沉积，引起血管壁软化，但本身又对血管壁存在一定的着保护作用，清除后，将 导致血管渗血和破裂。鉴于这些因素，本课题组应用多肽疫苗技术来构建_iIE单位 疫苗，采用当今已用于人的疫苗佐剂——MF59佐剂分别接种BALB／c小鼠和 APPSWE转基因鼠，观察抗体产生过程、小鼠行为学改变、脑和重要脏器的病理 学变化、体内免疫反应产生的机制等。 材料和方法 1疫苗的构建 采用Fmoc固相合成方法合成cys—AB。。，Cys—AB。。。和七聚赖氨酸，经 高效液相色谱纯化到95％以上。通过交联剂MBS将Cys—A B。。。 f3。；，cys—A A 分别和七聚赖氨酸耦联制成两种肽的多肽抗原系统(MAPAB。。和MAP0。。：)， 再经HPLC纯化到95％以上，进一步经质谱仪分析鉴定后收集分装。MF59佐剂是 0．Olmol／L MAPA PBS(pH7．4)稀释ABmB．。和MAP AB。．。三种抗原，使用 前把配制好的佐剂与抗原等体积混合即为接种疫苗。 2ABn及其亚单位疫苗接种BALB／c小鼠的免疫学效应实验 p。。 组(接种A B—z+MF59)，ABms组(接种MAPA8。。+MF59)和A B。。组(接种MAP AB一”+～1F59)，每组15只，首次接种采用背部多点(5～8点)皮下注射免疫， 15d后经鼻黏膜免疫第二次加强，以后每周进行一次鼻黏膜加强，共接种5个月。 用间接ELISA法，