原发性肺癌中HYAL1基因表达失活及突变研究.pdfVIP

中国协和医科大学中国医学科学院硕士研究生论文 SC SquamousCarcinoma 鳞癌 SCLC SmallCellLungCancer 小细胞肺癌 SNP SingleNucleotidePolymorphisms 单核昔酸多态 SSCP SingleStrandConformationPolymorphism单链构象多态性 TEMED Tetrarnethylethylenediamine 四甲基乙二胺 TSGs TumorSuppressorGenes 抑癌基因 中国协和医科大学中国医学科学院硕士研究生论文 摘 要 HYAL1基因位于染色体3p21.3的杂合缺失区域内，其编码的透明质酸酶分解透 明质酸，在肿瘤发生发展过程中发挥作用。研究发现HYALI在膀肤和前列腺肿瘤组 织中表达增强，是肿瘤促进剂;而细胞和动物实验发现HYAL1在肺癌细胞系中表达 缺失，抑制小鼠实验性结肠肿瘤和3LL肺癌的生长和转移瘤的形成，具有抑制肿瘤发 展的作用。 为了阐明组织中检测与细胞和动物实验产生不同结果的原因，确定HYAL1基因 在肿瘤发生发展过程中的作用，我们采用RTPCR方法检测HYALl基因在肺的肿瘤 组织和远癌正常组织中的表达情况，并探讨其与临床病理特征之间的关系;采用 PCR-SSCP和PCR-RFLP方法对整个HYAL1基因的外显子序列进行突变的筛选和鉴 定，并分析其意义。 我们得到的结果如下;1.HYALIMRNA短转录本在91例远癌正常肺组织中有81 例表达，只有 10.99% (10/91)的表达缺失，肿瘤组织中HYALI基因的缺失率高达 58.24% (53/91)，两者相比有显著的统计学意义 (p0.01);2.肿瘤组织中HYALI短 转录本的表达缺失与TNM分期均存在显著的正相关 (p0.01);3.研究还发现5例 转移癌 非〔原发性肺癌)标本有4例短转录本表达缺失，5例IV期 (远端转移)的肺 癌标本短转录本全部表达缺失，尽管由于标本例数不够没有计入统计，但可以提示短 转录本表达缺失与肿瘤转移有密切关系;4.HYALI基因短转录本的表达缺失与吸烟 指数、脉管侵犯和胸膜侵袭之间没有相关性(p0.05);5.HYALI基因短转录本在仅有 的1例原位癌标本中表达缺失，8例良性肺疾病患者有2例表达缺失，HYALI基因在 远癌相应正常肺组织中也有 10.99%的表达缺失，这提示HYALI基因的表达缺失可能 在形态学可见的改变之前就已经发生;6，两例膀胧癌 (G2级和G3级各1例)没有 HYAL1mRNA短转录本的表达;7.HYAL1基因的第三外显子有一个C一T突变。在 140例标本中，C等位基因的频率为85.71%,T等位基因的频率为14.29%;基因型频 率分别是CC基因型117例(83.57%),CT基因型21例(15.00%),TT基因型2例(1.43%); 8.HYAL,1基因的C~T突变后，造成氨基酸替代Thr~Met，但二级结构和疏水性 没变化。不同种属来源的HYALI蛋白Thr位点在进化上高度保守，而体内的七种透明 质酸酶序列在该位点则互不相同;9，综合SSCP与RT-PCR结果分析发现，正常和肿 瘤组织中HYALI基因mRNA表达的差异不是HYALI三种基因型差异造成，即C、T突 中国协和医科大学中国医学科学院硕士研究生论文 变与HYALImRNA表达缺失无关;10.HYALI三种基因型与肿瘤大小、淋巴结转移、 TNM分期、吸烟指数和分化程度、病理类型以及胸膜侵犯之间均没有统计学关系 (p0.05). 上述结果说明: 1.HYAL1基因有可能作为肿瘤抑制基因在肺癌发生发展中发挥重要作用，但 尚需细胞和动物实验进一步证实; 2.HYALl可能抑制肿瘤的生长，参与肺癌的侵袭和淋巴结转移过程; 3.突变不是HYALlmRNA在肿瘤组织中表达缺失的主要原因; 4.氨基酸取代后 ((Thr--Met),HYAL1蛋白的二级结