高糖对血小板线粒体机能影响.pdf

高糖对血小板线粒体机能的影响 刘昱菡硕士论文 高糖对血小板线粒体机能的影响 专 业： 人体解剖与组织胚胎学 硕士生： 刘昱菡 指导教师： 徐杰教授 中文摘要 背景：糖尿病(diabetesmellitus，DM)是一种全身系统性疾病，其慢性并发 症几乎可涉及全身各组织。一般认为，多元醇代谢异常、终末糖化产物增多、 蛋白激酶C激活、己糖胺通路活性增强是DM并发症发生的4种主要分子机制。 2001年Brownlee提出DM并发症的共同机制学说，即线粒体损伤可能使得上 述4条通路被激活，从而导致DM各项并发症的发生。自此之后，有关DM线 粒体机能的研究迅速开展起来。诸多不同部位、不同方面针对DM患者线粒体 机能的研究都证实了这一学说，即线粒体功能改变是DM并发症的发展的中心 环节。但尽管研究众多，其机制仍然没有得出最终结论。 DM患者血小板功能的改变在DM血管并发症的发展中起到重要作用，然而 涉及血小板线粒体机能的研究很少。在前期研究中，我们发现DM患者血小板的 线粒体膜电位较正常人低，但线粒体ATP含量较正常人高。膜电位是反映线粒体 功能的敏感指标，膜电位下降说明线粒体机能受到一定程度的损伤，我们考虑， 线粒体膜电位下降致使合成的ATP不能顺利转运出而在线粒体内聚积，进而影响 到整个细胞的生命活动。如同机体的其他部位，高血糖长期作用下，血小板线粒 体机能也同样会受到损伤。 血小板是无核细胞，其他细胞器完整，以血小板为对象研究线粒体机能可减 少实验因素对核DNA的作用而带来的干扰，更为直接的观察实验因素对线粒体 的作用。并且血小板取材非常方便，使用血小板作为研究对象整个实验流程简化 不少。所以我们考虑对血小板线粒体进行更进一步的试验，研究体外高糖对血小 高糖对血小板线粒体机能的影响 刘昱菡硕士论文 板线粒体机能的影响。探讨是否能建立新的、快捷的实验模型，从血小板线粒体 本身的特性延伸到线粒体机能共性方面，探讨高糖对线粒体机能的影响、分子机 制，以及药物治疗效果等，为DM患者体线粒体机能的相关研究提供理论基础。 目的：观察糖对SpragueDawley(SD)大鼠体外血小板线粒体机能的影响 和2型糖尿病患者血小板线粒体机能的变化，拟建立糖尿病血小板线粒体机能 退变观察模型。 方法：使用流式细胞仪测量血小板线粒体膜电位(血小板AtPm)，MTT法 检测血小板活力，采用血细胞计数板对血小板计数，透射电镜观察血小板超微 结构。 观察不同浓度葡萄糖对SD大鼠(2月龄，雌雄各半，体重180,,200 g，共 30只)血小板线粒体机能的影响：(1)采用自身对照研究，将10只SD大鼠血 小板加入5、15和30 mmol／L的葡萄糖溶液，比较3组血小板在37度下静置2、 24 h的血小板AtPm、血小板活力，以选择对体外血小板影响最为明显的葡萄糖 浓度。(2)高糖组和对照组血小板分别在4℃和37。C下静置，观察在2、6、lO、 24和72 h这4个时间点两组血小板AVm、血小板活力和血小板数量，找出变 化最明显的时间点。(3)比较4。C和37℃两个温度下，高糖组和对照组的血小 板AtPm。 对比2型DM患者和健康成人的血小板线粒体机能：(1)提取2型DM患 者10人(DM组)，健康成人lO人(对照组)的血小板，将两组血小板分别在 4℃和37℃下静置，测定2h、24 h的血小板Aqm、血小板活力和血小板数量。 (2)透射电镜观察2型DM患者和健康成人的血小板线粒体结构。 结果：动物体外血小板线粒体观察结果：(1)血小板计数显示，高糖组(30 mmol／L)和对照组(5mmol／L)血小板在4C放置72h后，两组血小板数量均 h 随时间减少，在2、24、48、724个时间点两组血小板数量的差异无统计学意 义。(2)SD大鼠血小板分别放入5、15、30mmo