沉香内生真菌的初步研究.pdfVIP

摘要 摘 要 内生真菌(Endophyticfungi)是一大类未被充分研究的真菌。近年来的研究 表明，几乎所有植物中都存在内生真菌，他们主要生长在植物的根、茎、叶等 器官的表皮下的组织当中。它泛指那些生活在健康的植物体内不引起任何病害 症状的所有真菌，植物内生真菌长期生活在稳定的植物微生态系统中，和宿主 建立了共生或半共生关系。研究表明已分离出的大多数植物内生真菌能够产生 与其宿主相同或相似的活性成分。 白木香树的茎干在刀砍、虫蛀、病腐后被真菌感染，木质部的薄壁细胞中 储存的物质产生一系列化学变化，最后形成树脂，即为沉香。为了找出含有树 脂的木材，必须砍倒树干才能找出含有沉香树脂的个体，导致大量白木香树遭 人砍伐，严重影响了白木香族群的生存。同时，沉香的高价也导致了白木香在 多个沉香产地国被非法砍伐及贸易。因此，从沉香木块中分离沉香内生真菌研 究人工结香具有重要的意义。 本论文通过优化内生真菌的分离条件，从沉香木块中分离纯化出9株沉香 内生真菌，然后通过苄基丙酮耐受性、人工结香材料分析等方法筛选出4株内 生真菌具有促进结香作用；对该4株内生真菌进行分子生物学种属鉴定、人工 结香条件实验和红褐肉座菌摇瓶发酵实验。实验结果概括如下： l、沉香内生真菌分离条件优化实验中，采用次氯酸钠(5％有效氯)作为表面 消毒剂处理效果较好，选择次氯酸钠(5％有效氯)消毒合适的时间为4min，最适 分离培养温度是26℃。共分离纯化出9株沉香内生真菌，经初步鉴定分属2亚 门、5目、5科、5属。 2、对沉香挥发油提取方法进行方法学研究，选择索氏提取无水乙醚回流法 结合GC．MS分析沉香挥发油成分组成。 3、沉香内生真菌的筛选实验中，先后通过苄基丙酮耐受性筛选、人工结香 样品变色部分的宽度和燃烧香味筛选，最后筛选出Aq．2、Aq．3、Aq．5b、Aq．7 等4株内生真菌。 4、沉香内生真菌的分子生物学种属鉴定，鉴定结果为：Aq．2为蒂腐色二孢 (Botryosphaeriarhodina)，Aq一3为红褐肉座菌(Hypocreajecorina)，Aq一5b里 koningii)。 摘要 5、对4株沉香内生真菌蒂腐色二孢、红褐肉座菌、里氏木霉、康氏木霉按 照封口方式、打孔位置、接菌方式、结香时间等方案进行人工结香条件研究。 最适结香条件：采用棉塞和木塞作为封口方式；选择树干自基部50～lOOcm之间 的区域作为结香位置；采用蒂腐色二孢菌株单菌结香和褐肉座菌、里氏木霉、 康氏木霉3株木霉属内生真菌混菌结香，其次是里氏木霉、康氏木霉混合人工 结香等作为人工结香方式；适当延长接菌时间，可以得到品质好的沉香。 6、红褐肉座菌摇瓶发酵液和菌体内含物GC．MS的检测实验，在发酵液成 分中未发现苄基、呋喃基等基团的成分存在，菌体内含物中检测出苯毗喃类化 合物，属于沉香复杂成分中的一种，但是该化合物的含量非常少，而且成分也 比较单一，采用微生物发酵产沉香物质的可行性受到限制。 关键词：沉香；内生真菌；分离纯化；人工结香 II Abstract _————-———_————————_————————————_———__———————————_—————一 Abstract whichhasnotbeen isalargecategoryfungi thoroughly fungi Endophytic shownthat distributein studieshave fungi stu