CENP-E基因表达下调可增强宫颈癌细胞对紫杉醇的敏感性.pdfVIP

肿瘤2009年2月第 29卷第2期 TumorVo1．29，No．2，February，2009 ·135· DOI：10．3781／j．issn．1000-7431．2009．02．008 lll丑懒 硇：_jle裔ea¨rch 基破碲霓 薯一 ： ‘ ?¨ — 曩 CENP—E基因表达下调可增强宫颈癌细胞对紫杉醇的敏感性 李素彦，翁亚光，蔡 燕 (重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室 ，重庆 400016) [摘要] 目的：探讨CENP—E(centromereproteinE)基因在紫杉醇治疗肿瘤中的作用。方 法：构建针对CENP—E基 因的特异 性短发夹RNA(shorthairRNA，shRNA)载体，电转法导入人宫颈癌HeLa细胞 ，转染48h后，运用实时荧光定量一PCR(real—time fluorogenticquantitativePCR，RFQ—PCR)、Western 印迹法及间接免疫荧光方法评价RNA干扰效果；CENP-E表达下调的H山 细胞及对照组细胞用不同浓度(1、3、10、30、100、300、1000和3000nmo]／L)的紫杉醇处理，MTT法检测细胞增殖情况，FCM法 检测细胞凋亡情况。结果 ：shRNA—CENP．E可有效抑制CENP—E的mRNA、蛋 白水平以及内源性表达。MTF结果显示，CENP— E表达下调的细胞在不同浓度紫杉醇作用下的增殖抑制率与对照组相比明显增加(P0．05)，并呈现剂量依赖性；FCM结果 显示，下调CENP-E表达后细胞的凋亡率明显增加(P0．05)。结论 ：下调CENP—E的表达能增强宫颈癌细胞对紫杉醇的敏 感性。 [关键词] 宫颈肿瘤；RNA，小分子干扰；细胞凋亡；紫杉醇 [中国分类号] R737．33；R73-362 [文献标志码] A [文章编号] 1000-7431(2009)02-0135-04 DownregulationofCENP-E geneexpressionenhancesthesensitivityofhumancervixcancercellstopaclitaxel uSu—yah，WENGYa-guang，CAIYan (KeyLaboratoryofLaboratoryMedicalDiagnostics，MinistryofEducation，Chongqing MedicalUniversity，Chongqing400016，China) [ABsTRACT] objective：ToinvestigatetheroleofcentromereproteinE (CENP—E)inthetherapeuticeffectsofpaclitaxelon tumor．Methods：P1asmidvectorcontainingCENP—EspecificshorthairRNA (shRNA)wasconstructedandeleetroporatedintohuman cervixcancerHeLacells．Real—timefluorescentquantitative—polymerasechainreaction(RFQ—PCR)，Westernblottingandindirectim— munofluorescencemethodwereusedtoevaluatethesilencingemciencyofRNA interferenceafter48h．HeLacellswithdown—regulated CENP—Eandcontrolcellsweretreatedwithpaclitaxe1atdifferentconcentrations(1，3，10，30，l0o，30o，1000and3000nmol／L)． TheproliferationofcellsweremeasuredbyMrITI1assay．Theapoptosisofcellswereanalyzedbyfloweytometry(FCM)．Results：CENP-E specificshRNA effectivelyinhibitedthemRNAandproteinexpressionofCENP．E inHeLacellsande