单环刺螠纤溶酶分离纯化及其药效学研究.pdfVIP

单环刺蜢纤溶酶的分离纯化及其药效学研究 摘 要 血栓栓塞性疾病一直以来严重危害着人类的健康，不仅发病率高，而且死亡 率和致残率也很高，它主要危害心、脑，肺等血管系统，造成人死亡或者偏瘫残 疾。全世界每年新增1500万血栓性病人，在我国每年约有200多万人死于心脑 血管疾病，急需溶栓治疗的病人超过500万。因此，血栓性疾病药物研发己经成 为当今全世界医学界研究的重点。 应用溶栓剂进行溶栓治疗是当前治疗血栓性疾病的主要手段。虽然溶栓剂已 发展了三代，但仍有诸多的副作用，如特异性降解纤维蛋白能力低，易诱发机体 出血等。因此，寻找和开发新型溶栓剂仍是治疗血栓性疾病的重要内容。鉴于海 洋生物活性物质自身其独特的优点，海洋生物逐渐成为新药研发的珍贵资源。本 实验室经多年研究，从海洋无脊椎动物单环刺嗌(蹄c办括材，2fcf聆cf螂)中寻找和分 离出了一种新型纤溶酶，命名为单环刺蜢纤溶酶(UFE)，并对其酶学性质和药效 学活性展开相关研究，现将主要研究结果简述如下： G一75，DEAE一52 1．单环刺蜢体腔液经分子量8，ooODa截留超滤，Sephadex 和SephacrylS一100柱层析分离，获得酶组分经HPLC分析其纯度为 质量约为26kDa。酶纯化倍数为10．2，回收率为13．9％。 2．对此酶进行相关酶学性质的研究，结果表明UFE的最适反应温度为50 6．O．9．O时相对稳定；在20℃一50 ℃，最适反应pH为8．O；酶活力在pH ℃温度范围内，具有良好的热稳定性。M孑+对酶的活性有促进作用，cu2+、 酪蛋白为底物，根据双倒数作图法，求得该酶的米氏常数‰=2．2m∥mL 为，最大反应速率VmaX=41．15¨咖in·mL。 3．UFE具有直接纤溶活性和激酶活性的双重纤溶能力。以尿激酶标准品为 参照，琼脂糖纤维蛋白平板法标定UFE的总活力效价为每mg酶含2477．2 个尿激酶活力单位，其中激酶活性为每mg酶含1605．6个尿激酶活力单 位，约占酶总活力的64．8％。 4．溶血性实验，皮下出血实验，全身过敏实验证实，该酶具有良好的生物 的可信限为531．83—623．21mg／l(g，无毒性。 5．根据uFE降解纤维蛋白原产物分析，推测其为Y．纤溶酶。 6． 体外溶栓实验表明，uFE组3h时血栓溶解率达76．3％，与蚓激酶对照组 有显著性差异(pO．01)，具有直接溶解纤维蛋白的能力。 7． 抗凝效应不作用于抑制血小板聚集这一环节。体内颈动脉血栓各指标实 验表明，UFE可使ELT时间显著缩短，纤维蛋白降解产物FDP含量增 多，D．二聚体反应呈阳性，说明UFE使机体继发性纤溶途径明显增强， 提高了机体整体的纤溶活力。 综上所述，UFE具有显著的抗凝活性和纤溶活性，具有重要的临床开发 价值，值得深入研究。 关键词：单环刺蜢；纤溶酶；分离纯化；抗凝活性；溶栓活性； 01of Puri fi cati on and Ii CScs researchreSearCn PharmacodvnamrnarmaCOdVnam fi bri noI i c from∥r厂ec厅／s“刀／c／，7c亡￡，s yt enzyme Abstract In hllIllall recent diseaseare health，not endanger onl