大豆异黄酮生物合成串联基因簇及其表达载体的构建.pdfVIP

第28卷 第 1期 大 豆 科 学 V_0I．28 No．1 2009正 2月 SOYBEAN SCIENCE Feb． 2oo9 大豆异黄酮生物合成串联基因簇及其表达载体的构建 夏循礼，杨广笑，何光源 (华中科技大学中英HUST-RRes基因工程和基因组学联合实验室，湖北武汉430074) 摘 要：植物异黄酮是一种重要的次级代谢产物，在植物的生理活动以及人类健康方面具有重要作用。植物异黄 酮生物合成途径有三个调控酶：查尔酮合酶(Chalcones~thme，CHS)，查尔酮异构酶(ChalconeIsomerase，CHI)和异 黄酮合酶(Isoflavonesnythase，IFS)。以大豆为材料，利用RT-PCR方法克隆到查尔酮合酶基因(CHS)，查尔酮异构 酶基因(CHI口)和异黄酮合酶基因(IFS)的eDNA(Genebank登记号分别为EU526827，EU526829，EU526830)经过 NCBI在线Blast比对，相似度均在98％以上，确认克隆的目标基因是正确的；将这三种基因顺序连接，构建成串联 基因簇 CHS—CHI口-IFS(命名为rlFS)，并且构建了rlFS的原核表达载体，进行了初步的表达研究。为进一步研究 植物异黄酮的生物合成以及进行异黄酮生物工程奠定了基础。 关键词：大豆异黄酮；生物合成；串联基因簇；表达载体 中图分类号：s565．1 文献标识码 ：A 文章编号：1000—9841(2o09)01—0007—04 DesignofTandem GenesClusterandExpressionVectorsforSoybeanIsoflavone Biosynthesis XIA Xun—li，YANG Guang-xiao，HE Guang—yuan (China·UKHUST—RResGeneticsEngineeringandGenomicsJointLaboratory，HuazhongUniversityofSciencenadTechnology，Wuhan430074，Hubei， China) Abstract：Plantisoflavonesisasortofimportantsecondarymetabolites wit}lsignificationinplantphysiologicalfunctionand healthinessforhumna being．Therearethreeregulatingenzymesinplnatisoflavonesbiosynthesispahtway：Chalconesyn- ． thase(CHS)，Chalconeisomerase(CHI)andIsoflavonesynhtase(IFS)．Inthisarticle，weclonedthecDNAsofCHS，CHI ， andIFSusingRT-PCRmehtod；thenassembledthesethreegenestomakeatnademgenescluster-CHS—CHI -IFS(we nameditasrlFS ；finallyweconstructedtheEcoli．expressionvectorofpET—rIFSandresearcheditsexpression．Allthese madehtegroundworkofrfurtherresea／chonsoybeanisoflavonebiosynthesisandisoflavoncengineering． Keywords：Soybena isoflavones；Biosnyhtesis；Tnadem genescluster；Expressionvector 植物异黄酮 (Isoflavone)是属于类黄酮 (Ha- 酮成分特定植物合成异黄酮能力和生物工程方法生 vonoid)化合物的一类植物次生代谢产物，主要分布 产异黄酮，改善食品品质、增强植物抗病能力、预防 在豆科蝶型花亚科、桑科、蔷薇科、苋科、卫矛科、大