IL32γ对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖及分泌的影响.doc

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 摘 要 类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种常见且致残率极高的严重危害 人类身心健康的系统性自身免疫性疾病。其病理上的特征表现为滑膜细胞的“肿瘤 样”增生、炎性细胞浸润、血管翳的形成以及关节软骨和骨的进行性破坏。RA 的发 病机制十分复杂，涉及多种细胞、多个细胞因子以及多条信号通路之间的相互作用， 尽管人类在过去的数十余年里对 RA 的病理生理进行了广泛而深入的研究，也取得 了突破性的进展，但其发病机制至今尚不完全清楚。因而有必要对 RA 的发病机制 进行更深一步的研究与探索，寻找到更多新的可能的治疗靶标。 白细胞介素-32（interleukin-32, IL-32）是新发现的一种存在六种或更多剪接变异 体的炎性细胞因子。研究发现，IL-32 高表达于 RA 滑膜的活组织检测中，而在骨关 节炎的滑膜组织中没有检测到 IL-32 的表达。IL-32 可通过多条信号转导途径，促进 细胞分化，参与细胞凋亡，诱导其他致炎细胞因子和趋化因子的生成，在炎症反应、 心血管疾病和自身免疫性疾病等方面发挥着重要作用。IL-32γ 是最长的剪接变异体， 且表现出最强的生物活性。本研究通过体外实验，探究 IL-32γ 对类风湿性关节炎成 纤维样滑膜细胞（RA-FLS）的增殖和分泌的影响以及其信号调节途径。通过 MTT 的方法发现了 IL-32γ 促进 RA-FLS 增殖的最佳浓度为 100ng/ml。通过细胞免疫组化 的方法发现 IL-32γ 是通过 NF-κB 信号通路来促进 FLS 增殖。采用流式细胞术检测 IL-32γ 对 RA-FLS 增殖的细胞周期的影响，发现它是通过促进 S 期向 G2 期转换来促 进细胞增殖的。用 RT-PCR 的方法检测了在培养基中加入了 IL-32γ 刺激后对 RA-FLS 中 IL-6 表达量的影响，用同样的方法检测了在分别加入 SB203580（p38MAPK 抑制 剂）、SP600125（JNK 抑制剂）、PD98059（Erk1/2 抑制剂）三种 MAPKs 信号通路 的抑制剂 30min 后再在培养基中加入 IL-32γ 刺激后对 RA-FLS 中 IL-6 表达量的影响， 结果表明 IL-32γ 可以促进 IL-6 的表达，但加入这三种抑制剂后发现只有加了 PD98059 后 IL-6 的表达量减少了，说明 IL-32γ 是通过激活 Erk1/2 信号途径来上调 IL-6 表达量。 I 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 此工作为探究 IL-32 在 RA 的炎症反应过程中的作用及其可能的作用机制打下了 基础，从而为 RA 的治疗提供理论基础、实验依据和新的可能的治疗靶标。 关键词：类风湿性关节炎 ；成纤维样滑膜细胞； IL-32γ；治疗靶标 II 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 Abstract Rheumatoid arthritis（RA）is one of the most common systemic autoimmune diseases with high deformity, which is seriously harmful to the human health. It is pathologically characterized by synoviocytes “tumor-like” hyperplasia, inflammatory cell infiltration, angiogenesis and the progressive destruction of articular cartilage and bone. The pathogenesis of RA is very complex, it involves in the interaction between multiple cells, cell factors and signal pathways, although in the past dozens of years the pathology and physiology of RA was widely and deeply researched, it also made breakthrough progress, but the exact mechanism that contributes to disease pathogenesis are largely unknown. Therefore, it is necessary for us to further research and explore