胰岛对妊娠的适应和催乳激素的作用论文.doc

胰岛对妊娠的适应和催乳激素的作用  摘  要  研究背景与目的  在 1 型糖尿病生产胰岛素的胰腺 β 细胞被自身免疫攻  击所破坏。而在导致 2 型糖尿病的肥胖，β 细胞量(mass)在糖尿病前期首 先增加，以代偿胰岛素抵抗，随后，β 细胞量和功能逐渐丧失，这预示 着高血糖的发生。由于β细胞的丧失在两种主要类型的糖尿病中都起着 重要作用，因此如何促进胰岛增殖和胰岛分泌功能越来越引起研究者的 兴趣，已成为糖尿病治疗研究的焦点。在特定的生理状态下，例如妊娠 和肥胖，胰腺胰岛β细胞量适应性增加，但其相关的信号通路尚未清楚。 妊娠中晚期 SD 大鼠的胰岛量增加，分泌功能增强，同时血清催乳激素 水平增高。研究其功能增强的机制，势必为糖尿病的治疗提供一条崭新 的思路。  材料与方法  1） 建立妊娠大鼠模型，进行腹腔注射的葡萄糖耐量试验  （intraperitoneal glucose tolerance test，IPGTT），空腹心脏采血，测定血 脂水平，放射免疫学方法测定胰岛素和胰高糖素的浓度。通过原位灌注 胰岛分离的方法，测定单个胰岛的 DNA 和蛋白质含量，对大鼠胰岛的大 小形态，胰岛素和胰高糖素分泌功能进行研究，对其胰岛素敏感性指数 上海交通大学医学院 2006 级硕士学位论文 进行分析；2）利用荧光实时定量 PCR 技术观察妊娠大鼠胰岛分泌功能 增强是否通过 JAK2/STAT5 通路；用胰酶消化胰岛，形成单个细胞，利 用全细胞膜片钳记录β细胞膜 Kv 电流，通过测定 Fura-2/AM 孵育的细 胞的荧光强度来测定[Ca2+]i。利用 Western Blot 技术检测妊娠大鼠胰岛 主要胞吐蛋白突触融合蛋白（syntaxin-1）、囊泡相关膜蛋白（VAMP-2） 和突触小体相关蛋白（SNAP-25）的表达水平。  结果  1）IPGTT 结果显示，妊娠 15d 和 21d 大鼠葡萄糖负荷后 30、60、  90 和 120 min 时点的血糖值均明显低于对照组（P0.05 或 P0.01），空 腹血糖低于对照组，但没有显著差异。妊娠组大鼠甘油三酯水平高于对 照组（P0.05）。空腹胰岛素、胰岛素敏感性指数均高于对照组（P0.05）。 与对照组比较，妊娠组大鼠胰岛体积明显增大，胰岛细胞致密度增加。 妊娠大鼠分离出胰岛直径大于 200μm 的比例明显高于对照组，胰岛单个 细胞直径亦有显著增加。以 16.7 mmol/L 葡萄糖孵育分离的胰岛 1h 时， 妊娠组大鼠胰岛素分泌水平明显高于对照组（P0.01）。以 2.8mmol/L 葡 萄糖孵育胰岛 1h 时，妊娠组大鼠胰高糖素分泌水平明显高于对照组 （P0.01）。2）催乳激素受体（prolactin receptor ，PRLR）、Janus 蛋白 酪氨酸激酶（Janus kinase，JAK2）、信号转导和转录激活子（signal 2 transducer and activator of transcription ，STAT5A）和 STAT5B 等胰岛 JAK2/STAT5 通路的关键分子，葡萄糖转运体 2（Glucose transporter-2 ， GLUT2）、葡萄糖激酶（glucose kinase,GK）等葡萄糖代谢的关键分子, ATP 敏感型钾通道（ATP-sensitive potassium channel ，KATP）、电压依赖性钙 通道（voltage-dependent calcium channel，VDCC）等胰岛素分泌相关的 分子在妊娠大鼠胰岛细胞中表达明显增高，而电压依赖型钾通道（the voltage-gated potassium ，Kv）表达降低。妊娠大鼠胰岛在 5.6mmol/L 葡 萄糖刺激时，[Ca2+]i 水平高于对照组，PRL 孵育 5 天的 INS-1 细胞株细 胞膜 Kv 电流亦高于对照组。主要胞吐蛋白 syntaxin-1 和 VAMP-2 的蛋白 质表达水平升高。  结论  1）妊娠期大鼠胰岛量增大，储备功能增强，有利于其适应增加的  胰岛素需求，保证母体和胎儿的正常代谢；2）催乳激素在妊娠期胰岛增 殖，功能增强中发挥重要作用；可能与其促进 JAK2/STAT5 通路、葡萄 糖代谢及胰岛素分泌相关的分子表达有关。  关键词  糖尿病，妊娠，催乳激素，胰岛，分泌，增殖 ADAPTATION OF ISLETS OF LANGERHANS TO PREGNANCY AND THE ROLE OF LACTOGENIC HORMONES ABSTRACT  Background and Objective:  In type 1 diabetes, the insulin