雌激素促进小鼠阴道组织中COX2的表达及其诱发外阴阴道假丝酵母菌病的机制研究.doc

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 雌激素促进小鼠阴道组织中 COX-2 的表达及其诱发外阴 阴道假丝酵母菌病的机制研究 硕士研究生：陈雪蓉  导  师：肖敦振 副教授  华中科技大学同济医学院计划生育研究所 武汉 430030 中文摘要 外阴阴道假丝酵母菌病（Vulvovaginal Candidiasis, VVC）是一种妇科常见的阴道 粘膜的真菌感染性疾病，该病发病率高且治疗后极易复发，对育龄妇女的身心健康造 成了很大的影响。白假丝酵母菌是最常见的致病菌种，约占 70%-90%。菌丝形态的 白假丝酵母菌对宿主有很强的粘附和侵入能力。前列腺素 E2（Prostaglandin E2, PGE2） 在白假丝酵母菌形态转化和增强其致病力过程中起重要作用。与酵母态相比，菌丝态 的白假丝酵母菌对宿主具有更强的粘附能力。而白假丝酵母菌在致病过程中，不仅可 刺激宿主产生 PGE2，其本身也可产生 PGE2，两者相互作用是造成白假丝酵母菌持续 感染人粘膜的发病机制之一。环氧化酶-2（Cyclooxygenase-2, COX-2）是调节花生四 烯酸转化为前列腺素（Prostaglandins, PGS）的重要限速酶，可被性激素、生长因子及 炎性因子等诱导表达，PGE2 是其主要的酶促产物之一。 近年来的动物实验和临床证据均表明，高雌激素水平使个体对外阴阴道假丝酵母 菌病的易感性增加，雌激素促进白假丝酵母菌菌丝形成及增殖，使其毒力增强。研究 表明，雌激素能显著性上调 COX-2 在人子宫微血管内皮细胞和狗前列腺组织中的表 达。对 COX-2 基因序列分析结果表明，其启动子中含有核转录因子（Nuclear Factor-κB, NF-κB）结合位点。NF-κB 作为一种具有多向调节功能的核转录因子，其信号通路的 激活可以上调 COX-2 的表达从而促进 PG 的生成。白介素-1β（Interlenkin-1β，IL-1β） 是在免疫和炎症反应中起核心作用的细胞因子，其能够促进 NF-κB 的表达和活化。基 于此，在阴道白假丝酵母菌感染过程中，雌激素是否能够上调阴道组织中 COX-2 的 表达来促进感染形成，NF-κB、IL-1β 在雌激素调控 COX-2 表达的过程中起到了何种 2 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 作用，以及它们与 COX-2 表达的协同关系，这些问题都值得探讨。 本研究采用雌小鼠给予外源性雌激素形成假发情来建立外阴阴道假丝酵母菌病 小鼠模型，应用免疫组化和原位杂交方法在细胞水平和分子水平研究COX-2及其 mRNA在小鼠阴道组织内的表达情况，以及应用免疫组化，ELISA法观察阴道组织中 NF-κB、IL-1β表达的动态变化，以及它们与COX-2表达的协同关系，旨在研究雌激素 诱发外阴阴道假丝酵母菌病的作用，藉此探讨其致病的可能机制，为更有效的防治外 阴阴道假丝酵母菌病提供新的思路和实验依据。分二部分简述如下：  第一部分  雌激素诱导外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型  中环氧化酶-2 的表达 目的：探讨雌激素对外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型阴道组织中 COX-2 表达的影响 及其在发病机制中的作用。 方法：采用雌性昆明小鼠，预先皮下注射雌激素使其处于假发情状态，然后接种 5×106 假丝酵母菌孢子构建 VVC 模型（EI 组），并设置雌激素处理未感染组（E 组）、未用 雌激素处理感染组（I 组）、和空白对照组（C 组）。动态观察小鼠阴道灌洗液的真菌 载荷量及菌丝生成情况，然后在接种后的不同时间点摘取小鼠阴道组织，对阴道组织 进行组织病理学检查（HE 染色和 PAS 染色），免疫组化方法检测阴道组织中 COX-2 蛋白的表达情况。 结果：与未用雌激素处理的 I 组小鼠比较，雌激素处理并接种白假丝酵母菌的 EI 组小 鼠阴道灌洗液的真菌载量分析显示自第 2 天开始可分离出高水平的 cfu 计数并持续到 接种后第 14 天。EI 组阴道组织病理结果发现自第 2 天至实验结束均可见到阴道粘膜 浅层有菌丝生长，阴道粘膜及粘膜下均有炎性细胞浸润。除 C 组外，各组小鼠阴道组 织内第 2 天出现 COX-2 的阳性表达，持续升高至第 7 天达到高峰；E 组在第 4、7 天 COX-2 免疫组化检测 OD 值分别为 0.157±0.017 和 0.161±0.014，与 C 组（0.101±0.014 和 0.106 ± 0.014）比较均具有统计学差异（P 均0.05）。EI 和 I 组第 7 天的 OD 值分 3 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 别达到 0.275±0.059 和 0.234±0.063，与对照组相比明显上调（P 均0.01），且 EI 组 显著高于 I 组（P0