肿瘤抑制基因启动子甲基化及转录表达与肺癌相关性研究.doc

原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包 含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共 同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。  作者签名：余宗涛  日期：  年  月  日  关于学位论文使用授权说明 本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论 文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文； 学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。  作者签名：  导师签名：  日期：  年  月  日  2 中 文 摘 要 肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，近年来肺癌发病率、死亡率在世界范围内均有较大 幅度的增长，究其原因是因为人们对肺癌的发病机制尚未彻底了解，缺乏有效的防治措施。 因此，彻底揭示肺癌的发生发展机制，以便对其进行有效的早期预警、早期诊断、早期防治 显得尤为重要。 研究资料表明：DNA甲基化机制参与了肿瘤的发生。甲基化是指DNA在甲基转移酶催 化下，将甲基基团-CH3加到胞嘧啶环的第5碳原子上形成5-甲基胞嘧啶（5-mC），多发生于 基因启动子区CpG岛。真核细胞的DNA甲基化是抑制基因活性的一种重要机制，其改变了 蛋白和DNA的相互作用，导致染色体结构的改变，降低基因的转录。并且有证据提示DNA 甲基化发生在细胞恶变之前，因此检测DNA启动子区是否发生了高甲基化有助于早期发现 突变细胞。 脆性组氨酸三联体基因(Fragile histidine traid, FHIT)是1996年由Ohta等用定位克隆技术 及外显子捕获法在3p 14.2发现的一种抑癌基因。在人类肺癌、胃肠道癌、乳腺癌等多种实体 瘤中都存在FHIT基因转录产物及蛋白表达的缺失。但FHIT基因的失活机制不同于经典的抑 癌基因，其在大多数肿瘤中只出现纯合子或杂合子的缺失，只有极少数肿瘤可检测到点突变， 因此人们将研究目光转向FHIT基因启动子甲基化区域，但国内外文献中关于FHIT基因启动 子区甲基化与肺癌关系的研究则较少。 RASSF1A(Ras association domain family 1A)基因，是最近克隆出的一种基因，定位于 3p21.3。RASSFIA 在多种人类肿瘤中因其启动子区 CpG 岛甲基化而发生表达失活。在 RASSFIA 基因敲除的小鼠倾向于易自然发生肿瘤，随着年龄增长，更易患肺腺癌及恶性血 液性疾病。尽管对 RASSF1A 功能没有完全清楚，但已证明其参与细胞凋亡，微管稳定及有 丝分裂的调节。 PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosometen张力蛋白同源的磷酸酶 基因)是1997年发现的抑癌基因，具有与磷酸酶、弹力蛋白同源序列，是双重特异性磷酸酶。 PTEN的功能包括：拮抗PI3 K的作用，对细胞起增殖负调控作用；PTEN抑制细胞迁移、铺 展和局部粘附；PTEN可以显著下调MMPs、IGFs、VEGF的表达。PTEN活性的改变与多种 肿瘤的发生、发展以及转移有着密切关系。PTEN表达缺失的机制包括PTEN基因突变和启动 子甲基化，PTEN突变可见于罕见的几种常染色体遗传缺陷病，包括考登病、Lhermitte- Duclos 病和Bannayan-Zonana综合征中，但PTEN突变导致PTEN表达缺失少见，而其启动子甲基化 4 导致表达缺失更为常见。PTEN启动子甲基化在部分肿瘤发生、发展以及转移中可能起重要 作用。 14-3-3σ是14-3-3超家族的一员，为细胞周期G2稽查点，在人类细胞DNA受损时产生应 答，在胞浆中阻止Cdc2/细胞周期素B1复合物，阻止有丝分裂，使细胞处于G2期，修复受损 的DNA。14-3-3σ表达可由于p53基因失活或其启动子甲基化而降低。14-3-3σ高甲基化被报 道于许多肿瘤中，包括肺癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌等。 CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)基因克隆和定位在染色体12q24. 3 ，染色体 不稳定是人类肿瘤细胞遗传学的一个标志，越来越有证据显示有丝分裂点的损伤与染色体不 稳定有关。CHFR是有丝分裂稽查点的一个调控基因，它可以延迟染色体浓缩。CHFR表遗 传改变导致失活是通过其启动子CpG甲基化而导致染色体不稳定已在人类几种肿瘤中被报 道。CHFR的功能是当微管受损时延迟染色体浓缩及进入细胞分裂中期。生化方面，CHFR 是一个泛素连接酶，降解异常细胞周