非病毒载体介导转基因鸡的初步研究.pdfVIP

河南农业大学2012届硕二L研究生论文 中文摘要 非病毒载体相比病毒载体具有一些优势：耐受性、相关的自身缺陷或诱导中和抗体反应 性及载体构建和鉴定的简便性。实验利用流体力学注射法、肌肉注射法和睾丸注射法三种方 法以非病毒载体进行转基因鸡研究，在基因治疗、基冈疫苗及转基因鸡生产上有一定的指导 意义。 龄小公鸡(10～】5s内完成)。利用荧光显微镜观察、PCR及免疫纲化法鉴定811、1d、3d、 5d心、肝、脾、肺、肾组织内EGFP基闪的表达，结果显示8h肝、脾、肺、肾均检测到 EGFP，但很快消火。并且8|1心、肝、脾、肺、肾绸织基冈组DNAPCR检测为阴性，说明 EGFP术整合剑鸡基冈绸上。此方法对鸡肝脏基冈功能获得或缺火快速研究提供了一个有力 的『：具。 用荧光显微镜观察、PCR利免疫组化法鉴定811、1d、3d心、肝、脾、肺、肾绸织内EGFP 基冈的表达，结果显示8h月千、肾组织内检测到EGFP的表达，随即消火。且其PCR结果为 阴性，说明EGFP木整合剑鸡基因组上。此方法对快速简便的基冈治疗提供了一种可能。 3．睾丸注射法：1 8周龄体重相近、健康公鸡睾丸内注射801』gpCAG．EGFP与脂质体混 该结果可能由丁-精子生成时质粒丢失或被内源性DNases的降解。尽管睾丸注射法重复性著， 但其仍有一定的优势。 关键词：1r病毒载体；流体力学注射法；肌肉注射法；睾丸注射法；鸡 2 河南农业大学2012届硕士研究生论文 Abstract Non—viral vectors tothe viralvectorshave compared some advantages： totheir0wn or tolerability、related inductionof shortcomings neutralizingantibody andthe of vectol‘constructi013and reactivity simplicity identification。Itutilizedthe t11l^eemethods ofhydrodynamics andtesticular injection．intramuscular injection f、Ortheresearchof chickenwith11011一viral injection transgenic vect01，S．whichhas certain for vaccines guidingsignificanee and chickel3 gcnetheraPY，genetic tl‘allsgenic pl’oduction． method：It 1．hydrodynamicsinjection is 1 0％weight pCAG—EGFPplasmid