水稻广谱抗性相关基因OsMOS3的克隆及功能研究.pdf

摘 要 水稻是我国主要的粮食作物，在其生产过程中由于受到稻瘟病、纹枯病以及白 叶枯病的危害，水稻的质量与产量受到严重的影响。本研究主要利用水稻基因组信 息并结合生物信息学，对水稻广谱抗病性基因仇删进行克隆并实现克隆基因的 过量表达、IⅢ～以及融合表达，通过转基因水稻对白叶枯病病原菌抗性的研究以 及水杨酸含量的分析，表明仇删具有广谱抗病性。具体结果如下： 1．仇删及干涉片段m护的克隆 结合生物信息学，在水稻基因组中获得与拟南芥中已经克隆的4纨fDs3的同 源序列，将其命名为仇删。以水稻日本晴的cDNA为模板，设计特异性引物 分别扩出仇且4鲫A段，1475 bp，伪?l扣船B段，1543bp，最后通过重叠PCR (ov甜ap)扩出仇朋鲫的cDNA全长(A+B段)，3018bp。另外，根据结构域分 析，在D．，^幻．s；中选取一段保守且含有功能结构域的核苷酸序列作为干涉片段 m咖，经特异性PCR扩增获得聊护，250 bp。分别构建出双元表达载体CPB一仇删， CPB一2F，P1302．0．，?Iz-D．S【罗一GFP。 2．35S．仍儡fG邺一GFP的亚细胞定位 通过基因枪将35S．仇朋鲫．GFP融合表达质粒瞬时转化到洋葱表皮细胞，利用 荧光显微镜进行亚细胞定位检测，结果显示仇删定位在细胞核内。 3．To代转基因水稻的阳性检测 分别对获得的3株仍?I抑．S罗过表达转基因植株，l株傀脚-IⅢ加转基因植 株，进行筛选标记基因潮霉素(HPT)的PCR检测，结果表明获得的4株水稻全为 阳性转基因水稻；D．譬^抑．S；半定量凝胶结果显示：与原始对照植株相比，0，^抑．S!； 过表达水稻中仇删上调表达，D，^幻．S罗一黜Ⅲi转基因水稻中侥删表达沉默。 4．T。代转基因水稻的抗病性鉴定 态水杨酸(舶eSA)的含量，结果显示：侥删过表达转基因水稻抵SA的含 量明显高于对照及IⅢAi转基因水稻；在幼叶期及剑叶期分别对os们．S；过表达、 仇删一RNAi、及原始对照日本晴植株进行白叶枯病病原菌接种鉴定，结果表明： 伪?I彻S罗过表达转基因水稻的抗病能力明显提高，而仍删一IⅢ加水稻更易感病。 综上所述，仇删是通过SA在植株体内的积累，参与SAR信号通路，从而 提高植株的整体抗病水平。 关键词：似黝巩水杨酸，系统获得抗性，水稻 Abstract 鼬ceisoneof也emain in01lr to aIld blast，sheambligllt graincrops Co啷Due this and ricehavebeell a髓Cted．In bact翻al s耐ously rese锄-ch， blight，meyieldqual时of rice infomationand rcsistance usinggcnome bioillfomatics，onebroad-spe蛐diseause in torealize rice．SeCond，we tecllnology gene仍沮牝毽罗w嬲cloned used廿ansgellic aIld缸sion riceto expression