ETV1转录因子在胃肠间质瘤中的实验研究.pdf

摘要 摘 要 背景和目的： 胃肠间质瘤(GIST)是胃肠道最常见的间叶组织肿瘤，主要由KIT或 续的活化引起细胞增殖分化失控导致GIST。目前，临床针对突变KIT或PDGFRA 基因为干扰靶点研发的药物，比如伊马替尼等抗肿瘤药物，由于突变的KIT或 PDGFIU基因存在多位点和二次突变的现象，从而导致抗肿瘤药物的耐药，这 需要我们进一步寻找针对GIST的新干预靶点，从而提高GIST的治疗和预后。 过程中， ETVI是一个很主要的调节因子。本研究体外构建干扰ETvl基因 shRNA的载体，干扰ETVl表达，观察其对GIST的生长和侵袭力的影响，以寻 找新的GIST治疗靶点。 方法： 采用含10％胎牛血清的DMEM培养液进行培养。 细胞。试验分组分成三组：空白组，阴性对照组(PLVX-shRNA组)，实验组 (PLvX．shRNA-hETVl组)，分别进行下述实验，最后比较组问的差异性。 的测定：采用WesternBlot方法；②观察细胞生长的变化：采用MTT法；③细 V-FITC／PI双染色法：④体外侵袭力的 胞凋亡的观察：采用流式细胞仪Annexin 细胞免疫化学方法。 研究结果： (1)比较体外干扰hETVI转录因子的各个靶点基因对转染后GIST-T1细 胞hETVI蛋白表达强度的检测。 Blot方法检测三大组hETV1蛋白的表达，实验组中PLVX．shRNA—hETVl．3亚 组hETVI蛋白基本不表达，而空白组明显表达，阴性对照组和实验组中的各亚 ll 摘要 1．2、 PLVX．S}lI斟A- PLVX．sbR 有显著差异(p=：o．05)，有统计学意义。 (2)体外干扰hETVl转录因子对GIST-T1细胞生长和凋亡的影响。 描述成生长曲线，实验组较空白组和阴性对照组的生长曲线在第l至6天之间 无明显下降趋势，而第6天之后，出现了一个明显下移趋势(表3．1和图3．7)， 总之，空白组、阴性对照组和实验组，在第1至6天之间无差异(p0。05)，无 统计学意义，而第6天之后有明显差异(尸0．05)，有统计学意义；另外通过流 式细胞仪观察细胞凋亡发现，实验组与空白组及阴性对照组相比较，实验组的 细胞早、晚期凋亡率明显高于空白组和阴性对照组(图3．8和表3．3)，有显著差 异(Po．05)，有统计学意义，但主要以晚期凋亡为主。 组穿过滤膜的平均细胞数为142．2／HP，实验组穿过滤膜的平均细胞数为60．2／HP。 实验组穿过滤膜的细胞数明显少于空白组及阴性对照组(图3．9和表3．4)，有显 著差异(砌．05)，有统计学意义；另外通过细胞免疫化学发现，实验组C．KIT 蛋白及MMP．2蛋白染色明显比空白组及阴性对照组较浅，同时通过平均光密度 分析，也比空白组及阴性对照组密度低(图4．O和表3．5)，有显著差异(PO．05)， 有统计学意义。 结论： 明显下调，从而影响体内hETVl基因的转录和翻译，最终导致hETVl基因体外 蛋白的表达量下降。 影响，而后期阶段，可影响细胞增殖和分化，导致细胞的凋亡。hETVl转录因 子可能参与GIST-T1细胞的生长、分化和凋亡过程。 III ——————————————————————————————一 塑垦—————一 细胞的的体外侵袭，影响GIST的发展和转移。 关键词：胃肠问质瘤；hETVl；C-KIT；MMP-2；shRNA IV Abstract ABSTRACT Baekground／Objeetive Gastrointestinalstromaltumorofthe themost