鸡新城疫卵黄抗体提取工艺及应用研究.pdfVIP

摘要 IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIllllllllll 43260 Y21 本试验目的是研究简便快速提取纯化卵黄抗体的生产工艺，适用于大规模生产。 卵黄抗体的提取主要就不同浓度泊洛沙姆法、不同浓度PEG6000法、水稀释法和冻 融法相结合进行比较，检测提取上清液抗体效价、去脂率等指标。应用冷冻干燥方法 浓缩卵黄抗体，比较冷冻干燥前后和不同倍数浓缩后产品抗体效价的变化。 通过饱和硫酸铵纯化卵黄抗体，主要就50％、33％、33％路线纯化卵黄抗体，HI 测定纯化前后抗体效价的变化，紫外分光光度计测定蛋白含量的变化；SDS—PAGE分 析各组提取的卵黄抗体纯化后有无差异。 选取母源抗体接近消失的60日龄公鸡随机分成试验组和对照组，试验组肌肉注 射卵黄抗体，剂量为2ml，试验用卵黄抗体包含新城疫抗体、禽流感H5亚型、禽流 感H9亚型抗体，研究机体肌肉注射卵黄抗体对血清抗体效价的影响。 选取新城疫抗体水平为阴性的公鸡随机分为6组：预防组、自愈组、低剂量治疗 组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、对照组，通过新城疫病模型试验研究肌肉注射卵 黄抗体的治疗效果。预防组在接毒前后2天肌肉注射2ml抗ND卵黄抗体；自愈组不 做任何治疗；治疗组接毒72h后开始连续治疗3天；低剂量组每天肌肉注射lml；中 剂量组2mll高剂量组4ml；对照组注射生理盐水。 试验结果如下 法上清液清澈，但沉淀不结实，不易分离。以氯仿提取法得到的卵黄抗体为标准，1．O％ 泊洛沙姆法上清液效价比氯仿提取法得到的卵黄抗体低1．2个HI效价滴度， 释法上清液效价比氯仿提取法抗体效价低了4．5个HI抗体滴度；因此1．0％泊洛沙姆 法提取抗体效价较高，结合冻融法可以进一步去脂，减少了后期浓缩的工作量，符合 大规模提取要求。 2．卵黄抗体纯化结果 饱和硫酸铵可以有效的纯化卵黄抗体，各组纯度差异不大，电泳分析主要以66KD 条带为主，抗体效价上升2．3个滴度，蛋白含量明显上升，表明卵黄抗体可以用此方 法纯化。 3．卵黄抗体浓缩结果 冷冻干燥可以有效浓缩卵黄抗体产品，冷冻干燥前后原倍稀释抗体活性滴度一 冷冻干燥可以明显提高卵黄抗体产品效价。 4．肌肉注射卵黄抗体对鸡血清抗体效价的影响 检测到注射后1—8天，试验组血清各个时间点的新城疫抗体水平均极显著高于与 高于对照组(尸O．01)，高滴度抗体水平维持5-6天后开始逐步衰减。 5．卵黄抗体抗新城疫治疗结果 预防组死亡率为5％，自愈组死亡率为70％、低剂量死亡率40％、中剂量死亡率 为30％、高剂量治疗组死亡率1 5％，对照组无死亡，预防组保护率为95％，治疗组 保护率比自愈组提高了30％．55％；并且在恢复过程中预防组和治疗组恢复正常采食 要早，鸡冠恢复正常颜色要快，表明肌肉注射卵黄抗体应用于新城疫治疗明显有效。 结论： 1．1．O％泊洛沙姆结合冻融法适合于大量提取卵黄抗体 1．0％泊洛沙姆可以减少卵黄稀释倍数，减少后续工作，且在试验组中上清液效价 最高；冻融法可以进一步去除卵黄抗体产品的含脂量，简单易行，两种方法联合应用 适合大规模生产。 2．重复饱和硫酸铵法能有效纯化卵黄抗体 饱和硫酸铵法可以有效去除卵黄抗体中的杂蛋白，抗体滴度和蛋白含量得到了明 显升高，在4种方法得到的卵黄抗体纯化后纯度无太大差异。 3．冷冻干燥法适用于浓缩卵黄抗体 冷冻干燥对卵黄抗体效价活性没有影响，浓缩产物抗体效价上升，效果明显。 4．抗NDV卵黄抗体对鸡新城疫病具有显著的防治作用 试验动物新城疫抗体为阴性，结果预防保护率为95％，治疗组比自愈组死亡率明 显降低，保护率提高了30％．55％，表明肌肉注射卵黄抗体对新城疫的治疗效果明显。 关键词：鸡；卵黄抗体；提取；纯化；浓缩；应用 Chicken Methodsand