肺癌A549放射抗拒细胞亚系的建立及其抗拒机制的初步研究.docVIP

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 英文缩略表  英文缩写  英文全称  中文名称 BCA Bicinchoninic Acid 2，2-联喹啉-4，4-二羧酸 bp EDPC DMSO dNTP EB ECL EDTA FCM ICN Kb mRNA NSCLC PBS PI rpm RT-PCR SDS VEGF Base Pair(s) Diethyl Pyrocarbonate Dimethyl Sulphoxide DeoxyribonucleotideTriphosphate Ethidium Dromide Electrochemiluminesence Ethylene Diamine Teraacetic Acid Flow Cytometry Intracellular Domain of Notch1 Kilobase Pair(s) Messenger RNA Non-Small Cell Lung Cell Phosphate Buffered Solution Propidium Lodide Revolutions per Minute Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction Sodium Dodecyl Sulfate Vascular Endothelial Growth Factor 1 碱基对 焦炭酸二乙酸 二甲基亚砜 脱氧核糖三磷酸 溴化乙锭 电化学发光技术 乙二胺四乙酸 流式细胞仪 Notch 胞内段 千碱基对 信使 RNA 非小细胞肺癌 磷酸盐缓冲液 碘化丙啶 每分转数 逆转录聚合酶链式反应 十二烷基磺酸钠 血管内皮生长因子 独创性声明 本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文 中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。 学位论文作者签名：  日期：  年  月  日  学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密□ ，在_____年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密□。 （请在以上方框内打“√” ）  学位论文作者签名：  指导教师签名：  日期：  年  月  日  日期：  年  月  日 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文  前  言  世界卫生组织国际癌症研究中心报告，目前全世界发病率最高的癌症是肺癌，每 年新增患者人数约 120 万。在我国，由于空气污染加剧、吸烟等多因素影响，肺癌的 发病率逐年攀升，尤其是非小细胞肺癌（NSCLC），约占肺癌总数的 75％-80%。约 2/3 的 NSCLC 患者在诊断时已失去手术机会，对这些不适合手术的中晚期患者主要采用以 放射治疗为主的综合治疗或单纯放疗。然而，这部分患者中，只有 10％左右能达到完 全控制，总的 5 年生存率约 5％左右；其主要失败原因是局部未控、复发和远处转移， 局部未控率可高达 70％，放射抗拒是影响放疗疗效的主要生物学因素。 阐明肺癌放射抗拒的机理就有可能设计出针对性的治疗方案，提高治疗疗效。以 往进行放射敏感性相关研究时，很多情况下是采用数个不同组织来源、放射敏感性各 异的细胞系进行比较，这种方法为探讨放射抗拒的机理提供了一定信息。但如果以同 一来源但具有不同放射敏感性的一对细胞为对象进行对照研究，将有更多的优势。 血管内皮生长因子(VEGF)于1989年由Connolly等分离并命名。它是一类糖蛋白, 由2个分子量为17KD～22KD的亚基经二硫键连接形成的二聚体,有一个独特的NH末端 疏水性氨基酸序列,具有细胞外分泌作用。目前发现，人类成熟的VEGF以五种亚型存 在VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189和VEGF206。其在胚胎组织中广泛表达；当 血管形成后,正常生理状态下被关闭。因此,正常成人组织呈低水平表达。但在肿瘤细 胞中,无论在mRNA还是蛋白质水平都过量表达,且原位杂交显示VEGF mRNA主要分布在 肿瘤细胞中,而细胞外缺乏VEGF mRNA,这提示VEGF是由肿瘤细胞产生的。其它研究中 免疫组化染色显示VEGF在肺癌细胞和