工业生产常用的微生物从自然界中分离出来就能被利用；.pptVIP

2 防止菌种衰退的措施 二 、 菌种的复壮 三、菌种保藏（strain preservation） 出发菌株（parent strain）选择应考虑的问题 ? 高通量筛选 诱变育种的几个概念 第四节 生产菌株的改良 三、DNA重组技术(分子生物学) 出发菌株的选择 诱变剂的选择 诱变操作及培养 突变株的筛选 突变高产基因的表现 形态突变 高产突变 耐药性突变 营养缺陷型突变 结构类似物抗性突变 出发菌株的稳定性： 选用具备优良特性的菌株： 挑选对诱变剂敏感的菌株： 注意菌株的生理状态及生长发育时间： 野生菌株 自发突变后获得的高产菌株 已经诱变过的菌株 出发菌株 考虑试验菌株的遗传背景：各种诱变剂有不同的作用机制，一种诱变剂的作用常主要集中在DNA的某些特异部位上，多次反复用一种诱变因子易出现 “饱和”或恢复突变现象，因此诱变时常采用多种不同的诱变因子或复合诱变因子。 诱 变 剂 的 选 择 菌悬液的制备 单细胞悬浮液：106个/mL 孢子悬浮液：108个/mL 诱变：预实验确定适宜的诱变条件 筛选：选择合适的筛选方法 ?　　随机筛选方法： 菌种经诱变处理后,进行平板分离,随机挑选单菌落,从中筛选高产菌株。为了提高筛选效率，发展了一些快速筛选方法（包括摇瓶筛选法，琼脂块筛选法等），并归纳出筛选高产菌的培养基选择准则: 　 1、制备一系列含有各种类型营养成分（生长限制因素）培养基； 　2、避免使用容易同化的碳源或氮源，（引起分解代谢物阻遏）； 　 3、加入缓冲液以减少pH的变化； 　 4、确定含有所需的辅助因子。 。 生长因子产生菌（对应于营养缺陷型）的筛选： 通过观察分离菌能否促进营养缺陷型（auxotroph）的生长，便可检出生长因子产生菌。 抗反馈突变株（抗结构类似物）的筛选 ： 结构类似物具有和代谢产物相似的反馈调节作用，但又不同于代谢物，不具有正常的生理功能，对细胞代谢又阻碍作用。 由于突破了原有的反馈调节系统，这些突变株就可以产生大量的该种代谢物。 ? 理性化筛选 高通量筛选（high throughput screening):将许多模型固定在各自不同的载体上，用机器人加样，培养后用计算机记录结果，并进行分析，使筛选从繁重的劳动中解脱出来，实现大规模筛选。 细胞模型：观察待测样品对细胞的作用，只能反映药物对细胞生长等过程的综合作用，不能反映作用的途径和靶点。包括各种正常细胞和病理细胞。 分子模型：包括受体、酶，其特点是药物作用的靶点明确。 通过高通量筛选方法，可以发现效果好、临床应用价值高的创新药物，治疗疑难病症。 形态突变型：指发生细胞形态变化或菌落形态变化的突变 型 生化突变型：没有形态效应的突变型，如营养缺陷型 致死突变型：生活力下降的突变型 条件致死突变型：在某些条件下能成活，在另一些条件 下是致死的突变型 营养缺陷型突变株：由于代谢障碍而成为必须添加某种物 质才能生长的突变株 温度敏感性突变株：可在某一温度下生长而在另一温度下 不能生长的突变型 杂交育种：两个不同基因型的菌株通过结合或原生质体融合使遗传物质重新组合，再从中分离和筛选出具有新性状的菌株。 一、常规的杂交育种:不须用脱壁酶处理，就能使细胞结合而发生遗传物质重新组合。 二、原生质体融合：原生质体的制备、原生质体的融合、融合子的选择、实用型菌株的筛选。 * * 第一节 工业生产常用的微生物 一、工业生产常用的微生物* · 从自然界中分离出来就能被利用； · 对野生菌株进行人工诱变，得到突变株才能被利用。