ATP-MgCl2对大鼠缺血再灌注肾脏损伤保护作用的研究.docVIP

?１４２? １材料与方法 １．１材料  贾琳，等．ＡＴＰ－ＭｇＣｌ２对大鼠缺血再灌注肾脏损伤保护作用的研究 ＮＧＡＬ的引物为： 上游引物序列：５’．ＣＣＡＧＧＡＣＴＣＡＡＣＴＣＡＧＡＡＣ一３’； 下游引物序列：５’－ＧＣＡＣＡＴｃＧＴＡＧＣＴＣＴＧＴＡＴｃ－３’。 ＡＴＰ—ＭｇＣｌ２（吉林敖东制药厂，美利欣注射 ＰＣＲ扩增体系同上，反应条件为：９４预变性 液），Ｔｒｉｚｏｌ总ＲＮＡ抽提试剂（上海华舜公司）， ５ ｒａｉｎ；９４ｌ ｍｉｎ，５６３０ ｓ，７２４５ ｓ，３２个循环； Ｍ．ＭＬＶ逆转录及ＲＮａｓｉｎ（日本Ｔｏｙｏｂｏ公司），Ｏｌｉ－ ７２延伸１０ ｍｉｎ，预期扩增片段长度为３２６ ｂｐ。 ｇｏＤＴ、ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ及ＴａｑＤＮＡ聚合酶（北京天根 内参照分别用扩增片段为２８７ ｂｐ和２０１ ｂｐ的 生化科技有限公司），ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ及琼脂糖（武 汉凌飞生物技术有限公司）。 １．２实验动物及分组 Ｂ—ａｃｔｉｎ。 Ｂ—ａｃｔｉｎ（２８７ ｂｐ）的上游序列为：５ ７ ＴＡＡＡＧＡＣＣＴＣＴＡＴＧＣ－３’： ４２只ＳＰＦ级雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠（３００—３５０ ｇ） 下游序列为：５’．ＡＣＴＧ，ＩＴｌｌＡＣＴＧＡＧＣＴＧＣＧＴＴ－３  ７， 购于同济医学院实验动物中心。将Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机 退火温度为５２ ｏＣ； 分为３组