GJB6在hela细胞的互作蛋白的研究.docVIP

中国耳鼻咽喉颅底外科杂志  第１４卷  ｉｎ３ ０  Ｃｘ３  ０）是间隙连接蛋白基因家族的一  Ｃ端２ １１～２ ６ １氨基酸Ｃ端功能域编码区， 员，ＧＪＢ６突变可导致非综合征型显性遗传性 经过纯化、回收、双酶切及连接，构建ｐＧＥＸ－ 耳聋（ＤＦＮＡ３）和非综合征型隐性遗传性耳 ４ Ｔ一２一ＧＪＢ６（２ １１～２ ６ １）载体。表达载体转 聋（ＤＦＮＢｌ）［２］。此外ＧＪＢ６还与多汗性外胚 层发育不良、角膜炎一鱼鳞病一耳聋综合征、 先天性无毛症等疾病相关。可见ＧＪＢ６与多 化大肠杆菌ＪＭｌ０９菌液，挑选克隆，抽提质 粒，通过双酶切及测序鉴定插入目的基因序 列无突变。再转化高蛋白表达的大肠杆菌 种疾病相关，尤其是遗传性耳聋。为探讨 ＢＬ２ １，先采用ＩＰＴＧ诱导小剂量蛋白表达，然 ＧＪＢ６在这些疾病发病机理中的作用，Ｃｏｍ－ 后再应用Ｉｆｙｍ诱导进行大剂量蛋白表达。 ｍｏｒｔ等［３］将野生型的ＧＪＢ６和ＧＪＢ６突变体转 １．２．２ 亲和纯化 将分别转化有ｐＧＥＸ一 染ｈｅＬａ细胞，进行亚细胞定位和间隙连接通 ４Ｔ一２一ＧＪＢ６（２ ｌ １～２ ６ １）和ｐＧＥＸ－４ Ｔ一２空 道染料转移研究，结果发现突变体不能定位 于质膜或不能形成功能性的间隙连接通道。 问隙连接通道的形成及其功能的发挥直接依 载体的ＢＬ２ｌ细菌，在ｌ Ｌ含