兔骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及生物学特性研究.pdfVIP

免骨髓问充质干细胞的分离、培养、鉴定及生物学特征鉴定 摘 要 目的 建立兔骨髓问充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、扩增和 鉴定的方法，对其生物学特性进行观察，为其用于组织工程提供实验基 础。 方法 穿刺抽取兔髂骨骨髓，用密度梯度离心法和贴壁培养法相结 合，分离兔骨髓间充质干细胞，进行体外培养扩增，绘制其生长曲线， 计算倍增时间，测定细胞贴壁率和细胞活力，用倒置显微镜、透射电镜 观察细胞的生物学性状。通过免疫荧光组织化学鉴定细胞，了解其部分 表型特点。 结果 分离培养的细胞贴壁生长，呈梭形，细胞增殖能力强，原 代细胞呈集落生长，12—15天达到融合，传代后增殖速度加快，平均倍 增时问为34h，随传达次数的增加细胞的增殖能力有所下降，1、3、5 代细胞接种12h后贴壁率在90％以上，第1—5代活细胞比例在95％以上， 第6、7代培养细胞活力下降，透射电镜显示细胞分裂增殖能力旺盛。 骨髓MSCs均一表CD。而不表达CD。。 结论 密度梯度离心与贴壁培养相结合，可有效分离和扩增骨髓 细胞作为软骨组织工程的种子细胞：细胞表面标志CD34阴性、cD44阳 性可作为鉴定骨髓间充质干细胞(Mscs)的一种方法。 硕士研究生 董玉泉(骨外科) 指导教师 滕学仁教授 关键词：骨髓间充质干细胞：细胞培养：鉴定；组织工程学 STUDYoFTHEISoLATIoNCULTURE．IDENTIFICATIoNAND BIoLoGICALCHARACTEIUSTlCSoFRABBITBONEMARRoW MESENCHYMALSTEMCELLS Abstract ’roestabllshamemodtbrtheisolationculture、 objectiVe： andidentificationofmarrow stemcells行om multiplication mesenchymal rabbitsinVitro，observet}leir and fea_tures mndament bi0109ical supply fortissue theory engineering． MSCswasharvested丹omiliaca． ma啪w Methods： crista Bone ofNewZeaJandwhiterabbitwas and density centrifuged aspirate gradient in culturebottles．TheceUswereex锄inedinvert cultured plastic by was andtransmissionelecⅡ．0n curve microscope microscope．Thegrowth drawnandcell time、confluentrate、