微生物谷氨酰胺转胺酶发酵条件的优化.pdfVIP

摘 要 微生物谷氨酰胺转胺酶发酵条件的优化 研究生姓名：庄晓辉 学号：Y 导师：陈婉蓉 华东师范大学生命科学学院 学校代码：10269 摘要 微生物谷氨酰胺转胺酶(蛋白质一谷胺酸吖谷陂酰胺转移酶，EC2．3．2．13，简 称MTG)能催化蛋白质分子内或蛋白质分子间的交联，从而改变各种蛋白质的 功能性质，在食品、化妆品、制药等工业领域具有广阔的应用前景。研究微生物 发酵法生产MTG的历史较短，因此还存在多方面的问题。解决这些问题包括选 择较适宜的基质，优化MTG发酵生产的各种培养条件，找出影响微生物合成 MTG的关键因素等，以提高MTG的发酵水平，为实现MTG的工业化生产奠定 良好的基础。 本文以实验室保藏的链霉菌HS．1为生产菌株，以提高酶活为主要研究目标， 以摇瓶发酵为主，主要研究的内容有：(1)发酵培养基成分对MTG摇瓶发酵的 影响；(2)人造沸石对产MTG的影响及提高产MTG酶活机理的探讨；(3)发 酵条件的优化及lO升罐的小试实验。通过以上研究得到如下结果： 1．通过对不同氮源对酶活的影响研究，以高压水解所得豆饼粉水解物为有机氮 源有利于酶活的提高，酶活为3．86u／mL；合适的水解条件是：2moI／L的盐 酸，水解1h，固液比为1；3，所得豆饼粉水解物发酵酶活最高为5．17u／mL； 其最适的添加量为2．5％；硫酸铵的最适添加量为O．3％；甘油是链霉菌 u／mL；在 (Streptomycessp,)HS-l发酵生产MTG的最适碳源，酶活为6．82 培养基中添加豆油和菜籽油不利于酶活的提高。通过L9(34)正交实验，最终得 到各因素对谷氨酰胺转胺酶酶活的影响顺序为：豆饼粉水解物酵母浸膏甘 油硫酸铵。响应面分析方法对配方进行进一步优化，确定培养基最佳配方 为：豆饼粉水解物2．4％，甘油2．4％，酵母浸膏0．5％，硫酸铵为0．3％。摇 2u／mL。 瓶发酵的酶活为：7．1 2．流加硫酸铵。MTG酶活及生物量和对照初始加入硫酸铵相比有所下降。培 养基加入1％人造沸石，可显著提高MTG酶活。通过研究人造沸石对发酵 过程中MTG酶活、铵离子代谢、菌体生长、碳源代谢的影响，初步证实了 解除铵离子对产MTG酶的阻遏可能是人造沸石提高酶活的原因。 3．通过研究种龄和接种量对发酵酶活的影响得出的结果为：最佳种龄为32h， 摘 要 适宜的接种量范围为7％一10％。通过考察MTG发酵周期对摇瓶发酵的影响， 得到最适的发酵时间为48h。10L罐小试实验的结果为：10L发酵罐与摇瓶 的发酵过程，其变化规律较为相似，但发酵周期稍短，44h小时酶活达到最 u／ml 高位4．62 关键词；链霉菌；微生物谷氨酰胺转胺酶；培养基组分；发酵；优化 ABS+ntACT of of Conditions Fermentation Optimization Microbial Transglutaminase Master XiaohuiID．number：Y candidate：Zhuang Supervisor：ChenWanrong oflifeand EastChina