RNA聚合酶Ⅰ和Ⅲ在HeLa细胞核中转录位点的定位研究.pdfVIP

RNA聚合酶l和III在HcLa细胞核中转录位点的定位研究 摘要 摘要 真核生物细胞核中有三种RNA聚合酶，即RNA聚合酶I、II和III，它们分 别转录产生不同的RNA，其中RNA聚合酶I转录合成45S rRNA前体；聚合酶 II转录合成mRNA前体及大多数sn rRNA、tRNA RNA；聚合酶III转录合成5S 和一些小分子RNA。 自上个世纪六十年代初期，人们相继运用细胞化学染色、电镜放射自显影等 进行研究的结果表明：RNA聚合酶I的转录发生在核仁中，RNA聚合酶III的 转录发生在核质中。但随着新的研究技术的发展和应用，人们对RNA聚合酶I 转录位点的早期的研究方法的可靠性提出质疑；同时，根据一系列间接的实验推 论RNA聚合酶III的转录可能发生在核仁中。但迄今为止，有关RNA聚合酶I和 ⅡI的转录位点还缺乏直接的实验结果的证明。 本实验采用构建的能被RNA聚合酶I或RNA聚合酶IⅡ识别的重组质粒， 以人的HeLa细胞为材料，运用电穿孔转染、荧光原位杂交并结合激光共聚焦显 分布进行了研究。结果显示：RNA聚合酶I的DNA和RNA水平的杂交信号都 出现在核仁里，信号多而且强，有力地证明了RNA聚合酶I的转录发生在核仁 里，转录子也位于核仁内：RNA聚合酶III的DNA水平的荧光信号大都出现 在核仁里，少数出现在核仁边缘，由此推测出RNA聚合酶IⅡ的转录主要发生在 核仁及其周边区域，可能由于运动较快，其转录子分布于核仁边缘和核质中。本 实验为RNA聚合酶I和IⅡ在真核生物细胞核中的转录位点提供了直接的证据， 这对人们进一步了解RNA聚合酶的转录机制、加工和运输过程及RNA聚合酶 之间的结构与功能关系等均具有重要的意义。 关键词：R_NA聚合酶I和Ⅲ；荧光原位杂交： 激光共聚焦显微镜； 转录位点；HcLa细胞 RNA聚台酶1和lII在HeLa细胞核中转录位点的定位研究 Abstract Abstract are ofRIgA Therethree in I、II types eukaryotic polymerases cells：polymerase and differentfunctionsinthecells．RNA Isynthesizes III．Theyperform polymerase three and28SrRNA．RNA II mRNA rRNAs，5．8S，18S largest polymerase produces RNA rRNAand wellas 1Ⅱmakes5S tRNA，as a protein，andpolymerase encoding fewsmallnuclearRNAs． have The localizationsofthese beenstudiedsince transcription poly