斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰及DEC1%2fSharp2%2fStral3基因的克隆和功能研究.pdfVIP

斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰及DECl／Sharp2／Stral3基因的克隆和功能研究 斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰研究 摘要 RNA干扰是指通过导入一段与内源基因同源的双链RNA序列(dsRNA)， 使内源mRNA降解，从而导致转录后的基因沉默。RNA干扰广泛存在于细菌、 植物和动物中。脊椎动物中，长链dsRNA能引发干扰素反应而引起非特异性的 应用于基因功能研究。目前斑马鱼siRNA于扰方面的报道极少。本文中，我们 开展了U6启动子驱动的siRNA介导的斑马鱼RNA干扰研究。选择功能明确且 Mitfb和GFP报告 与表型相关的4个斑马鱼内源基因Myf5，D193，Mitfa(Nacre)平ll 基因为靶基因，分别选2～4个靶位点，构建U6启动子驱动的siRNA表达载体， 显微注射至斑马鱼受精卵，追踪观察胚胎发育。根据表型分析结合整胚原位杂交 结果，探测siRNA对斑马鱼体内基因表达的影响。结果表明：1．)U6启动子驱 动的siRNA能抑制斑马鱼靶基因的表达，但抑制作用不完全。2．)在所选的靶位 点中，siGFP对斑马鱼体内的GFP表达无明显的抑制作用；3．)针对不同的靶位 非特异性，有待进一步探索。 中图分类号：Q34 斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰及DECl／Sharp2／Stral3基因的克隆和功能研究 斑马鱼DECl／Sharp2／Stral3基因的克隆和功能研究 摘要 细胞分化，增殖和凋亡过程中起重要的调控作用。DECI参与哺乳类生物钟的调 控，是哺乳类的第5类生物钟基因。本文克隆了斑马鱼的DECI基因，进行了生 物信息学分析，检测了LD周期下斑马鱼胚胎发育阶段DECl的表达和成体眼中 011498．2)， 人(NM 极其相似的保守结构域，属于bHLH转录因子DECl的家族成员。2．)斑马鱼胚 胎发育早期直到4体节期，DECI普遍且强烈表达，随着发育的进行，DECl在 眼，体节，血岛和松果体等多种组织中表达；至Pec—fin stag(60hpf)，体节等组 织中的DECl表达减弱，至Protruding—mouth 在松果体和视网膜色素上皮中。DECl在斑马鱼成体眼中呈现有规律的表达。3．) 斑马鱼DECl的过表达和反义抑制都严重影响胚胎发育，造成胚胎体短，体节弯 曲，心血管发育异常并且发育严重迟滞的现象。提示1．)DECl很可能参与斑马 鱼生物钟的调控，是斑马鱼中的一类生物钟基因；2．)DECl参与斑马鱼胚胎发 育过程中多种组织器官包括体节和心血管系统等的细胞分化。 中图分类号：Q34 斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰及DEcl／shar口2，stral3基因的克隆和功能研宄 inZebrafish SiRNA．MediatedRNAInterference Abstract RNA a mechanism interference(RNAi)isposttranscriptionalgenesilencing double—stranded causes ofits triggered RNA(dsRNA)anddegradation by mRNAs．RNAihasbeenobservedinawide of homologous rangeeukaryotes， andanimals．In ds