辅酶Q-%2c10-对D-半乳糖衰老小鼠大脑作用实验研究.pdf

争文辐要 辅酶Q，。对D一半乳糖衰老模型小鼠大脑影晌 的实验研究 摘 要 曩的：辕酶0，又名泛醌，是存在予真棱细照线粒体内 膜上的一种脂溶性醮类化合物。它的化学结构中含有…个醌 环及一个由多个异戊二烯单位组成的侧链，对于人而言，侧 链由lO个异戊二爝单位组成，故名Qm蠛酶Q璁是线粒体 内膜中嗽子传递链的组成成分，参与氧化磷酸化，合成ATP， 为细胞的各种生命活动提供能避。研究表明辅酶Qlo还是细 胞合成的～种还原剂，．可清除癌蛊基，减少氧化损镌。但随 着增龄，组织中辅酶Q10的含鬟逐年下降。衰老的自融基学 说认为机体衰老的根本原因是体内自由撼的产生与清除不 能保持动态平衡，造成自由基的过剩。大曩的自由基攻击生 物大分子，破坏它们的结构和功能，导致梳体功麓的下降。 所以及时为机体补充自由基清除剂可以清除自由基，延缓衰 老。国内多采用中药进行抗衰老研究，如黄芪、人参等，但 箕其体裁分帮蓊理佟麓澎不清楚。本实验以D一半霉t耱老纯 模型小鼠为研究对象，通过形态学改变和生化指标的定量分 析，观察灌胃补充外源性辅酶Q，o对实验动物大脑抗氧化功 麓酶影穗。弱对戳缝生素嚣{乍秀对照，掇跑较辖酶Q，。与维 生素E的抗氧化作用。 方法：选用雄性昆明种小鼠lOO只，体重20克左右， 接小甄体重睫规分为霆篷：正常对照组、襄老模型缝、维生 素E组、辅酶Qto组。通过腹腔注射大剂量D～半乳糖建立衰 中文摘要 老动物模型。衰老模型组每目腹腔注射D一半乳糖溶液 150mg·kfl·d_1，正常对照组则每日腹腔注射等量生理盐水。 维生素E组随衰老模型组每日腹腔注射D一半乳糖溶液 150mg·kg。·d～，同时灌胃补充维生索E溶液50mg·kg_·d一； 辅酶Q，。组随衰老模型组每日腹腔注射D一半乳糖溶液 常对照组和衰老模型组每日灌胃补充等量蒸馏水，共8周。 实验过程中实验动物正常饮水和进食，饲喂标准颗粒饲料， 自然节律光照(12小时光照，12小时黑暗)。每周称体重一 次，根据体重变化调整动物用药量。 喂养8周后，断头处死动物，取动物头部，去掉小脑、 脑干，迅速剥离大脑，用预冷的生理盐水洗去血污，滤纸吸 干多余水分，电子天平精确称重。将大脑置于干净的弯盘中， 按重量体积比为1：9的比例加入预冷的组织匀浆缓冲液(蔗 mmol·L一，Tris·Hcl5 011mmol 糖250 mmol·L～，EDTA·2Na ·L～，pH7．5)。用眼科剪将组织剪碎，转移到5ml的玻璃匀浆 器中进行手动匀浆(匀浆器下部插到冰块中)。将匀浆液在 台式离心机上离心15分钟，转速为3500rpm。离心后，弃沉 淀取上清。将上清液保存在低温冰箱中用于超氧化物歧化酶 (SOD)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮科O)、丙二醛(MDA)、 脂褐素等生化指标的测定。 同时，留取实验动物进行形态学观察。每组随机抽取3 只小鼠，腹腔注射25％乌拉士Et(1890mg·kgJ)麻醉动物。将小 鼠固定在操作台上，剪开胸部暴露心脏，左心室插管，剪开 右心耳，快速灌注生理盐水，后改灌4％多聚甲醛溶液，至 小鼠四肢僵硬，尾部变白透明。断头取小鼠大脑，置于4％ 孛文援要 多聚甲醛溶液中固定，石蜡包埋，冠状面逐续切片，苏木精 一伊红染色，于光学盟微镜下观察大脑皮滕的变化。同时， 正常对慧缝翱衰老模鳖缓分别甏取脑缀缓捌蚕电镜标本。首 先脱颈椎处死动物，迅速剥取大脑皮层，取其中部皮层切成 lmm×lmm×3mm的小块，置于4％戊二醛磷酸缓冲液中进行 蓖露定，丙后置予锇馥中避彳亍螽蠢定。常栽嚣醺梯度脱承， 812环氧树脂包埋后，进行超薄切片，醋酸铀和柠檬酸 Epon 铅双重染色。用日立H-7500透射电子显微镜观察大脑皮层 神经元酶超徽结麴交豫并掬摄照片。 结采：喂养8周后衰老模溅组小鼠毛发枯黄，粗糙无光 泽，皮荛松散，体态臃肿，行动迟缓。而正常对照组小鼠毛 发白色套光泽，行动正常。药物治疗组小鼠一般状态好于衰 老模型缌小鼠。 光镜下，小鼠大脑皮层神经元细胞质为红色，细胞核为 蓝色，靼组标本