金丝猴胰岛素样生长因子Ⅰ克隆、表达及其序列分析.pdfVIP

四川大学硕士论文 金丝猴胰岛素样生长 因子I的克隆、表达及其序列分析 摘 要：野生动物是自然生态环境的重要组成部分，保护野生动物尤 其是拯救濒危野生动物，对维持地球生态平衡和保持生物多样性具有 重要意义。圈养人工繁殖，是移地保护濒危动物，增加动物种群数量 的重要手段之一。但在圈养条件下，多数濒危动物繁殖率都较低，严 重阻碍移地保护的进程。因此，本研究针对濒危动物繁殖率低的金丝 猴，开展了在动物生长发育和生殖过程中发挥重要作用的胰岛素样生 长因子I(IGF—I)的基因克隆、序列分析和表达研究，并探讨了今 后生物工程生产金丝猴等濒危动物胰岛索样生长因子I(IGF—I)用 于人工繁殖实践的意义和可能性。主要结果如下： 1．剃瘸RT-PCR技术双籽驻缰织骞。增窭金丝猴蓑藏寨榉生长因子 I(IGF-I)编码区序列，克隆和分析了进化上较保守，并在生长发 弯、生虢霉瑟免疫调节中发撵重要作用的金丝猴]GF—l基因。线装显 示，它编码153个氮基酸的简体蛋白质，预测的分子量分别为16．9kD。 AmIGF cDNA编码48氨基酸的信号肽和70氨基酸的成熟肽。 2。与GenBank中人、猪、鼠、马、牛、兔、山羊哺摹L动物韵IGF—I 序列比较，其编码成熟肽序列的同源性从93．8％(马)到88．6％(鼠)， 开放握玲残豹弱滚缝蔽9《．熊(入)到88。溉(鬣)。 IPTG 3．构建金丝猴IG卜I基因的原核表达载体pET—IGF—I， 诱导居京BL21密主蓥孛褥裂亳藏激会表这，表达懿融合蛋叁DsbA- IGF-I的分子量约为32kD，并以可溶形式存在于细胞中。为遴一步 的研究打下了基础。 4．IGF—I在肖牧业生产中被广泛用于键生长发育和促繁育，目前 已在猪、牛、羊等动物中褥至O试用，但是效果营遍较蓑，其原因不甚 清楚。本试验比较了克隆酾金丝猴与入、猪、鼠、马、牛、兔、出羊 哺乳动物相应序列，发现众丝猴序列与人的膨列具有最高的同源性， 箍示久{G卜i胃姥是金丝猴久工繁殪磷究艨蠲中岁}滚注异耱激素豹 4 四川大攀硕士论文 最谴选择。 关键谰： IGF-I；基因克隆；序列分析；融合表达 四JII大学硕士论文 and Cloningexpressionsequence roxellanae) analysisofgoldenmonkey(Rhinopithecus insulin．Hke factorI growth gene AharaeeThis wMchvitalrolesin and play growthreproductive Ie鲫ali姒国DisaⅨ纽lgthe姗菌cance and afilaherlowardsthe oftheirreeombinant p。鳓碰印of p帕duedon IGF-I study by recombimut their in DNA把函遮砖andapptica如n assisted璀∞矗蜘l弧e辩nary resultsⅥmasj日托愀 RT-PCR fiu-n I—By IGF-I 153amino