家蚕微孢子虫表面蛋白P32.7分离纯化及P30.4基因相关领域分析.pdfVIP

摘 要 ／ ． f微孢子虫是一类专营细胞内寄生，无线粒体的单细胞原生动物。微孢子虫的动物 学分布范围非常广，能感染寄生脊椎动物和无脊椎动物，是经济昆虫、鱼类、兔类、 皮毛动物、啮齿类及灵长类动物的致命病原。从1857年Nageli在家蚕中发现家蚕微 粒子(Nosemabombycis)后，近二十年来，已相继从家蚕体内分离到微粒子虫属 ；’{ 对有关微孢予虫盼研究对于稳定生产、卫生防疫和坏境生态诸方面都有着重要意义。 j +r 养蚕业作为我国的传统产业，在农业上一直占有重要的经济地位。丽由家蚕微孢子虫 Ⅳbombycis引起的家蚕微粒子病则是养蚕业的毁灭性病害。由于家蚕微孢予虫能经卵 传染危害家蚕子代而被到为蚕种生产唯一的检疫对象，因此这一领域一直是蚕病学的 坷 研究重点和热点√本研究以家蚕微孢子虫Ⅳbombycis的蛋白质尤其是表面蛋白为研 ／ 究对象，对其进行分离纯化及其相关领域的分析研究。得出如下研究结果： 一、家蚕徽孢子虫 彪bombycis表面蛋白P32．7的分离纯化及测序． ／ ＼ 均一性和折光性一致，无组织碎片和杂菌，纯度高，对微孢子虫活性影响小，适合进 、√／ 一步实验的要求jv然后用SDS法提取家蚕微孢子虫的表面蛋白，经SDS—PAGE电泳， ／ 结果显示，家蚕微孢子虫表面蛋白有三条主带，而且分子量较为接近。 将SDS处理前后的家蚕微孢子虫镜检，发现SDS处理后微孢子虫的形态没有大的 改变，只是孢子个体变小，活动能力下降，对家蚕的致病力明显减弱。 ／ 现为单峰，符合测序的要求。尸厂 ／ His ProThr His 酸的序列为N-GIu ArgTyrAIa-C。产y一 hrg Asp 二、家蚕徽孢子虫甩bombycis总蛋白的电泳分析． 采用极丝激发一冻融法提取家蚕微孢子虫Ⅳbomb．vcis的孢子总蛋白，通过 SDS对孢子总蛋白进行分析。f电泳结果显示家蚕微孢子虫总蛋白呈现复杂的带 、 ，， 型，总共出现有30多条条带。)，’r’ 三、家蚕徽孢子虫Ⅳbo四bycis表面蛋白P30．4基因5’末端外延区段的分析． ／ 分析，发现该序列缺少起始密码子，且对其的功能分析不完全。本实验在过去研究的 基础上，)对家蚕微孢子虫表面蛋白P30．4基因的5’末端外延区段进行了进一步的分 以家蚕微孢子虫ⅣbombycisRNA反转录的cDNA为模板进行扩增。得到一个大小约为