浮游藻群落组成荧光识别分析仪初步研究.pdf

浮游藻群落组成荧光识别分析仪的初步研究 摘要 赤潮的频繁爆发及其规模的不断扩大，迫切需要建立一种快速、有效的浮游 藻群落组成监测技术，以实现对浮游藻群落组成的识别测定及赤潮的应急监测。 荧光技术是近年来逐渐发展起来的一种浮游藻种类测定技术，在常用的检测方法 中，这一方法由于仪器简单、便于实时在线原位测量而广受欢迎。 在对我国近海海域赤潮与非赤潮期间浮游藻群落组成特点进行总结的基础 上，本文最终选择了分属于硅藻，金藻，绿藻，甲藻，黄藻，隐藻和蓝藻7个门 的53种我国近海常见的浮游藻进行培养研究，分别测得上述浮游藻在不同光照、 温度和生长周期的活体三维荧光光谱。为实现研制使用以单色发光二极管为激发 光源的浮游藻荧光自动分析仪的目标，本文从原始三维荧光光谱中选择了13个激 发波长点组成了新的浮游藻离散三维荧光光谱，在此基础上，利用小波分析、 Bayes判别和非负最小二乘等技术建立了我国近海常见浮游藻的识别技术。取得 如下研究成果： 1．利用逐步判别分析技术，结合可获得的单色发光二极管的实际情况，并经 1 10rim)来 nm，5 460nm，470m，490rim，500 组成新的浮游藻离散三维荧光光谱。 波分解，筛选到各小波基函数具有浮游藻种类特异性的荧光特征谱，利用模拟混 合样品对各类荧光特征谱进行测试，找出最佳荧光特征谱，并对各荧光特征谱之 间的互补情况进行分析。基于此，利用四阶导数．db7荧光特征谱建立了门水平上 的浮游藻荧光标准谱库；利用各类荧光特征谱之间的互补性建立了属水平上 db7．coil2联用的荧光标准谱库。 3．对于不同混合比例(25％，50％，75％，85％，100％)的模拟混合藻样品， 在门水平上的平均识别正确率分别为：62．7％，84．4％，95．9％，97．1％和99．9％； 到50％时，就能对除黄藻、绿藻以外的其它各门类藻达到85％以上的平均识别率。 对于属类的识别，当优势度大于80％时，优势种就能在整体水平上获得较好的识 别(平均识别正确率80％)，其中28种常见赤潮藻的识别正确率达到85％以上。 所建立的二级谱库能够有效的提高圆海链藻，刚毛根管藻，强壮前沟藻，简裸甲 藻和裸甲藻等这些藻的属水平识别正确率。 4．对于实验室所做的混合样品，门水平上，当优势门浮游藻所占比例为75％ 时，除金藻门外，其它浮游藻的识别正确率均在80％以上；当优势门浮游藻所占 比例为100％(即同一门内的两种藻相混合的情况)时，除金藻门外，门水平识 别正确率均为100％。属水平上，当优势藻所占比例为75％时，属水平平均识别 正确率为80．6％，其中除盒型藻，圆海链藻，球形棕囊藻，裸甲藻和海洋原甲藻 外，其它优势藻种的属水平识别正确率都在80％以上。 5．对于现场水样：胶州湾调查水样，门类上识别结果均与镜检结果一致；麦 岛围隔水样，12个水样中有11个能在门水平对优势藻进行正确识别。属类水平上， 对于优势藻种比例大于80％的水样，胶州湾3个水样中有2个的优势藻能被正确识 别，麦岛围隔5个水样中4个的优势藻被正确识别。 6．以上述研究成果为技术支撑，所设计的浮游藻荧光自动分析仪目前正在 制造中，将有望在测试完善后，真正形成能够在现场应用的浮游藻荧光分类监 测自动分析仪。 本文的创新之处在于针对研制以单色发光二极管为激发光源的荧光自动分 析仪的目标，从原始三维荧光光谱中选择出13个激发波长点，组成了新的浮游藻 光光谱进行分解，基于各荧光特征谱的互补性，建立了浮游藻荧光二级标准谱库。 实现了在正常情况下对浮游藻群落组成(包括优势门及次优势门)及相对含量的 识别测定，为赤潮的爆发提供预警；而当赤潮爆发时，在属水平上识别引发赤潮 的优势藻种。 关键词：离散三维荧光光谱，小波分析，二级谱库，浮游藻群落，识别 II 一 ■ ■ ■ ‘ ■o P OntheaI tI U0reScence Prel imi reSearch narY